目的要求

學習霉菌的標本制備方法，觀察根霉、毛霉、青霉、曲霉、白地霉的形態構造。

材料

1. 菌種：白地霉（Ceotrichum candidum）搖瓶培養液；根霉（Rhizopus sp．）、毛霉（Mucorsp．）、曲霉（Aspergillus sp．）、青霉（Penicilli—um sp.）平板。

2. 染料：乳酸石炭酸棉藍液。

3. 其他：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環、解剖針、培養皿、玻璃棒、濾紙、20％甘油。

原理

霉菌菌絲較大，細胞容易收縮變形，孢子容易飛散，在制備霉菌標本時，常用乳酸石炭酸溶液作??為介質，具有不使細胞變形，可殺菌防腐，不易干燥，能保持較長時間等優點，若加入棉藍，又具有一定染色效?果。

霉菌的有些結構在制片過程中易被破壞，影響觀察，可采用載玻片培養法。此法便于直接顯微鏡下觀察，尤其適用于根霉的假根，曲霉的足細胞及分生孢子鏈等結構的生長情況的?觀察，并且還可在同一標本上觀察到?微生物發育的不同階段的形態。

方法

1．白地霉的觀察

取一塊干凈的載玻片，加一滴白地霉培養液，加蓋玻片制成水浸標本片，在顯微鏡下觀察白地霉菌絲及節孢子的形態??。

2．其他霉菌觀察

（1）一般觀察法：加一滴乳酸石炭酸棉藍液于潔凈的載玻片中央，用解剖針從菌落的邊緣處挑??取少量帶有孢子的菌絲，放入乳酸石炭酸棉藍液中，再細心地把菌絲挑散開，加蓋玻片，注意不要有氣泡產生。置于顯微鏡下觀察，菌絲呈藍色，顏色的深度隨菌齡的增加而減弱。

觀察??根霉時，注?意觀察其菌絲（無橫隔）、假根、孢子囊柄（與假根相對著生）、孢子囊、囊軸、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。

觀察毛霉時，注意觀察其菌絲（無橫隔）、孢子囊柄、囊軸、孢子囊孢子及厚垣孢子。

觀察曲霉時，注意觀察其菌絲（有橫隔）、足細胞，分生孢子梗、頂囊、小梗（形狀、層數及在頂囊上的著??生情況），分生孢子的著生情況。

觀察青霉時，注意觀察其菌絲（有橫隔），分生孢子??梗，帶狀枝（小梗的輪數及對稱性），分生孢子的著生情況。

（2）載玻片培養法：

①濕室準備：在培養皿底部先放一張圓形濾紙，在濾紙上依次放上“Z”型玻璃棒、載玻片和蓋玻片（兩片），蓋上培養皿蓋，用紙包扎好，高壓（9.8×10⁴Pa）滅菌20分鐘。

②用接種環挑取少量霉菌孢子，置于濕室的載玻片的中央，用無菌滴管滴加少量冷卻至45℃左右的察氏培養基。

③將鑷子在火焰上灼燒滅菌后，取無菌?蓋玻片蓋在培養基上，然后輕輕壓一下。用滴管取融化的石蠟將蓋玻片的三邊密封，如圖19-1-（1）所示。

④將3～5m1 20％甘油倒于濕室內，以保持濕度，如圖19-1-（2），將培養皿置于28℃恒溫箱中培養2天。

⑤將培養好的載玻片取出，置于顯微鏡下觀察。

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