主要病原菌的認識（二）

目的要求

認識葡萄球菌、鏈球菌、鼻疽桿菌、肉毒梭菌、魏氏梭菌的形態染色特性和培養特性。

操作步驟

一、葡萄球菌

可挑取葡萄球菌的培養物或病料涂片，自然干燥后，火焰固定，用革蘭氏染色后，鏡檢觀察。

（一）形態染色特性  ?革蘭氏陽性呈葡萄串狀排列，在病料涂片中，常呈單個，成對或短鏈狀，在固體培養基上生長的常呈典型的葡萄串狀排列。不形成芽胞，無鞭毛，不運動。某些葡萄球菌形成莢膜或粘液層。

（二）培養特性  ?普通瓊脂上菌落呈圓形、濕潤、不透明，邊緣整齊表面隆起的光滑菌落。由于菌株不同可呈現黃色、白色或檸檬色。血液瓊脂平板上多數致病性菌株形成明顯的溶血。

二、鏈球菌

挑取鏈球菌培養物或取病料（膿汁、乳汁、滲出液等）涂片，用革蘭氏染色或堿性美藍染色，鏡檢后觀察。

（一）形態染色特性  ?革蘭氏陽性鏈球菌，多數鏈球菌在血清肉湯中常呈長鏈狀排列，幼齡培養物易發現莢膜，以后消失，而在固體培養基上或病料涂片上，常為短鏈狀排列，有些鏈球菌在膿汁中常呈長鏈狀排列。

（二）培養特性  ??營養要求高，在普通瓊脂培養基上生長不良，在血瓊脂上形成透明、閃光、微隆起有粘性的露滴樣的小菌落，有溶血現象，分為三型；甲型（α）溶血又稱綠色溶血型，有些不產生典型的溶血現象，培養24?小時后，在血平板深處形成綠灰色菌落，其周圍有不透明綠色輪暈。乙型（β）溶血，在血平板上菌落周圍形成無色透明的溶血環，其直徑有時超過菌落的直徑。丙型（γ）溶血，又稱非溶血型，在血平板上的菌落周圍不產生溶血現象。

三、鼻疽桿菌

??病料可取患馬的鼻汁、皮膚潰瘍分泌物、膿腫的穿刺物及病死馬內臟（肺臟、肺的淋巴結、肝、脾等）作涂片，自然干燥后用革蘭氏染色或堿性美藍染色，待干后，鏡檢觀察。

（一）形態染色特性  ??革蘭氏陰性短桿菌，菌端鈍圓，形狀平直或微彎。在病料中多單在，有時成雙或成叢排列。老齡菌呈顯著的多形性，如球桿狀、分枝狀和長絲狀等。其陳舊培養物用美藍染色時，可見到著色不均勻的顆粒。

（二）培養特性  在甘油瓊脂上，24??小時后形成細小、正圓形、灰白色帶有黃色光澤，表面濕潤，半透明，稍粘稠的小菌落。培養時間延長，菌落增大至2～3mm??，呈灰黃色。在馬鈴薯培養基上，可生成黃棕色粘稠的蜂蜜樣菌落。在孔雀綠酸性復紅瓊脂上，菌落呈淡綠色。不溶血，有特臭。

四、魏氏梭菌（產氣莢膜梭菌）

??用皰肉培養基的培養物注射小白鼠，死后取肝臟抹片或取培養物涂片，用瑞特氏或革蘭氏染色，干后、鏡檢、觀察。

（一）形態染色特性  ??革蘭氏陽性粗大桿菌，兩端鈍圓，單在、成雙排列，或短鏈排列。有芽胞，位于菌體中央或近端。在機體內形成莢膜，無鞭毛，不能運動。

（二）培養特性  厭氧菌，但不嚴格，營養要求不高，在普通瓊脂上呈灰白色不透明，表面光滑，邊緣整齊的菌落（直徑2～5mm??），葡萄糖血清瓊脂上形成中央隆起或圓盤樣大菌落，表面有放射狀條紋，邊緣鋸齒狀，灰白色、半透明，外觀好似“勛章”。血瓊脂有明顯β溶血。

五、肉毒梭菌

用皰肉培養基的培養物注射小白鼠死后，取肝觸片、或培養物抹片，用瑞氏染色或革蘭氏染色，干燥鏡檢。

（一）形態特性  革蘭氏陽性較粗大桿菌。菌體兩端鈍圓,多數單在，偶爾有成對和短鏈狀排列。有周鞭毛，運動活潑，無莢膜，有芽胞，呈橢圓形。A、B??型菌株芽胞的直徑大于菌體的橫徑，位于菌體近端，故菌呈匙形或網球拍狀。其余菌型芽胞的直徑一般不超過菌體橫徑。

（二）培養特征  ?為嚴格厭氧菌，對營養要求不嚴格。在普通瓊脂上形成灰白色、半透明邊緣不整齊的絨毛網狀、并向外擴散的菌落，直徑為3～5mm。血清瓊脂上培養48～72?小時，形成中央隆起，邊緣不整齊，灰白色較粗糙絨球菌落。卵黃瓊脂平板上，在肉毒梭菌菌落之下的培養基形成局限性乳白色不透明區域，同時還形成一層彩虹樣光彩覆蓋在菌落及其邊緣的瓊脂上。皰肉培養基上，生長良好，開始生長的1～2天，肉湯呈均勻混濁，A、B、F型菌將肉渣消化呈爛泥狀，肉渣變黑，有惡臭味，產生氣體。培養兩天后，混濁肉湯變清亮，菌體下沉于管底。

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