主要病原菌的認識（一）

目的要求

認識結核分枝桿菌、布氏桿菌、炭疽桿菌、豬丹毒桿菌和多殺性巴氏桿菌的形態染色特性和培養特性。

操作步驟

一、結核分枝桿菌

取培養物抹片（如沒有培養物可用卡介苗代替）、干燥、火焰固定，用齊一尼氏法作抗酸染色（方法見實驗二），干后鏡檢觀察。

（一）形態染色特性  本菌為革蘭氏陽性細長或微彎桿菌，牛型比人型短而粗，禽型具多形性。無芽胞、無莢膜，不能運動，用齊一尼氏法作抗酸染色，鏡檢，紅色細菌為抗酸菌，其他細菌為蘭色。

（二）培養特性  本菌營養要求高，生長緩慢，需2～6周才能發育好，在甘油瓊脂上形成干燥顆粒狀，乳白色不透明疊起的菌落。

二、布氏桿菌

布氏桿菌的病料最好取新鮮流產胎兒的胃內容物，或用羊水、胎盤的壞死部分，陰道分泌物等，必要時也可取乳汁和尿進行檢驗。但乳汁和尿因含水較多，最好先用離心法沉淀，取其沉淀物進行鏡檢，分離培養或接種豚鼠。

取上述病料涂片（如無病料可用布氏抗原代替），用鑒別染色法著染后再進行鏡檢觀察。

鑒別染色法常用以下兩種：

（二）科茲洛夫斯基法  具體方法依次為：涂片、自然干燥、火焰固定，用2％沙黃（即番紅花紅）水溶液加溫染色，出現氣泡為止（約1.5分鐘），充分水洗1～2分鐘，再用1％孔雀綠水溶液染色0.5～1分鐘（亦可用美蘭液代替孔雀綠），水洗、干燥、鏡檢。

本菌呈紅色，其他菌呈綠色（最好40分鐘內鏡檢，經久則紅色褪去）。

（二）改良齊一尼氏法  具體方法依次為：涂片、干燥、火焰固定，用稀釋石炭酸復紅液染色10分鐘，水洗，再用0.5％的醋酸處理，不超過30秒鐘，充分水洗，用1％美蘭輕度復染20秒鐘，水洗、干燥、鏡檢。

本菌呈紅色、背景為蘭色。

（三）形態染色特性  革蘭氏陰性球狀或小而短桿菌，多單在，少短鏈，無運動性，不形成芽胞和莢膜。用科茲洛夫斯基鑒別染色法，本菌呈紅色，其他雜菌呈綠色。

（四）培養特性  流產布氏桿菌和綿羊布氏桿菌初代分離需在5～10％CO₂環境中始能生長（也可用燃燭法）。在肝湯瓊脂上，72小時形成細小濕潤、閃光、圓形隆起菌落。

血清肝湯瓊脂內做振蕩培養，3～6天后布氏桿菌在距表面0.5cm處形成帶狀生長。

三、炭疽桿菌

可取病料（血液、水腫液、脾、淋巴結或人工感染小白鼠死亡后的肝）或培養物進行涂片，待自然干燥，火焰固定后，病料用美蘭或瑞特氏染色，培養物用革蘭氏染色，干后鏡檢，觀察。

（一）形態染色特性  革蘭氏陽性大桿菌。在組織標本（病料制片）中單個存在或呈短鏈排列，有莢膜，無芽胞，菌體呈桿狀，兩端相連處呈竹節狀，在人工培養物標本中，細菌呈長鏈排列，無莢膜，有卵圓的中央或偏端芽胞。

（二）培養特性  在普通瓊脂上培養24小時，生成灰白色、扁平、毛玻璃樣不透明菌落，邊緣不整齊，呈卷發狀，明膠穿刺，呈倒立松樹狀。

四、豬丹毒

病料采集：可疑豬丹毒疹塊型取皮膚,敗血型采取腎、肝、脾、心血、淋巴結和骨髓等檢驗，在實驗中常用本菌培養物（肉湯或固體培養基加生理鹽水稀釋）注射小白鼠或鴿（在鴿體內菌形很大）死后取肝、心血涂片，自然干燥后用瑞特氏或美蘭染色（方法見實驗二），待干后，鏡檢觀察。

（一）形態染色特性  革蘭氏陽性，平直或微彎的細小桿菌，細菌散在或簇集于白細胞中，在慢性豬丹毒心內膜疣狀物上，多呈長絲狀，不運動，不形成莢膜和芽胞。

（二）培養特性  在血瓊脂上24～48小時后生成針尖大露滴樣圓形小菌落，菌落無色透明，周圍可形成狹窄的綠色溶血環。在普通瓊脂上生長不佳，明膠穿刺不液化，呈試管刷狀生長。

五、多殺性巴氏桿菌

盡可能采取新鮮病料（心血、肝、脾、淋巴結、骨髓等）制成涂片，在實驗中，可用本菌的肉湯培養物注射小白鼠或雞，死后，取肝涂片，自然干燥后，再用瑞特氏或堿性美蘭染色，待干后鏡檢觀察。

（一）形態染色特性  革蘭氏陰性球桿菌，菌體兩端鈍圓，常單在，有時成雙，組織抹片用堿性美蘭或瑞特氏染色，干后鏡檢觀察，本菌呈典型明顯的兩極著色。

（二）培養特性  血瓊脂上生長良好，24小時可形成淡灰色、圓形、光滑濕潤、邊緣整齊露珠樣小菌落，不溶血。

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