pfu指的是噬菌體的空斑形成單位。以下是關于測定M13效價的一個方法:
測定噬菌體滴度
只有當噬菌體的感染復度MOI (multiplicity of infection)值遠低于1時(即細胞過量時),噬菌斑的數量才會隨著加入噬菌體的量而呈線性增加。正因如此,建議檢測噬菌體貯液的滴度時,在感染前進行稀釋,而不是在高MOI值的情況下稀釋被感染的細胞。低MOI值有助于確保每個噬菌斑僅含一個DNA序列。
1. 接種ER2738單菌落于5-10 ml LB培養基中,搖床培養至對數中期(OD600 ~0.5)。
2. 細胞生長時,微波爐融化上層瓊脂,分成3 ml等份于滅菌試管中,每個噬菌體稀釋度一管。保存于45℃備用。
3. 37℃預溫LB/IPTG/Xgal平板,每個噬菌體稀釋度取一個平板備用。
4. 在LB中準備10倍系列稀釋的噬菌體。建議稀釋范圍:擴增的噬菌體培養物上清:108-1011;未擴增的淘選洗脫物:101-104。每個稀釋度換一新鮮吸頭,建議使用帶濾芯吸頭以避免交叉污染。
5. 當菌體培養物達對數中期,分成200 μl等份于微量離心管中,每個噬菌體稀釋度一管。
6. 每管加入10 μl不同稀釋度的噬菌體,快速震蕩混勻,室溫溫育1-5 min。
7. 將感染細胞加入45℃預溫的上層瓊脂培養管中,每次一管,快速混勻,立即傾注于37℃預溫的LB/IPTG/Xgal平板上。適當傾斜平板將上層瓊脂均勻鋪開。
8. 待平板冷卻5 min后,倒置于37℃培養過夜。
9. 檢查平板,計數有~102個噬菌斑的平板上的斑數。然后用此數目乘以稀釋因子即得到每10 μl噬菌體的空斑形成單位(pfu)滴度。
上一篇:病毒的起源與進化
下一篇:碘化物緩沖液提取噬菌體單鏈DNA