用苯酚:氯仿抽提
1. 把樣品至置于離心管中,加入等體積的苯酚:氯仿,
2. 混勻,使之成為乳濁狀;
3. 12000rpm離心, 5 分鐘:
4. 用槍頭把水相移到另一離心管中.
5. 加入等體積氯仿并重復2—4
6. 用2/3體積的異丙醇(或2倍無水乙醇),1/10體積的3M醋酸鈉,沉淀10分鐘(-20度長時間沉淀可提高產量)
7. 12000rpm離心5分鐘,棄液體
8. 70%的乙醇洗鹽10分鐘,去上清,
9. 重復8一次,再12000rpm離心棄液體.
10. 50度烘干.
11. 去離子水溶解。
LiCl 抽提
1把樣品至置于離心管中,加4/5體積10M LiCl
2 室溫下靜置1分鐘
3 12000rpm離心5分鐘
4把液體轉移到另一離心管中
5.加2/3體積的異丙醇沉淀10分鐘
往下的步驟同于上面的8-12
E.coil總DNA的提取
1 將過夜培養的大腸桿菌離心去上清。
2 加500μl水重懸浮,加入500μl 2% SDS, 混合振蕩約1min,55℃溫育15min,直到溶液的粘度顯著下降。
3 加入0.1倍體積的3mol/L醋酸鈉(自然pH)。
4 加入150μl中性苯酚,混合振蕩均勻后,12000rpm離心5min,移取上清液,棄去白色中間層。
5 用中性苯酚/氯仿重復抽提直至看不見(或非常少)中間層為止,
6 加入1倍體積的異丙醇(或2倍體積的無水乙醇),上下顛倒混合直至出現白色絮狀DNA 沉淀團,用吸頭挑出DNA沉淀團。
7 用70%乙醇洗滌DNA沉淀團兩次。
8 烘干,溶解DNA沉淀。
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