龙8娱乐官方网站

龙8娱乐官方网站

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服熱線:400-0532-596
龙8娱乐官方网站微信公眾號
龙8娱乐官方网站天貓旗艦店
微生物技術資料
文章檢索

大腸桿菌DNA純化



錄入時間:2011-6-20 15:17:29 來源:互聯網

用苯酚:氯仿抽提
1. 把樣品至置于離心管中,加入等體積的苯酚:氯仿,
2. 混勻,使之成為乳濁狀;
3. 12000rpm離心, 5 分鐘:
4. 用槍頭把水相移到另一離心管中.
5. 加入等體積氯仿并重復2—4
6. 用2/3體積的異丙醇(或2倍無水乙醇),1/10體積的3M醋酸鈉,沉淀10分鐘(-20度長時間沉淀可提高產量)
7.  12000rpm離心5分鐘,棄液體
8. 70%的乙醇洗鹽10分鐘,去上清,
9. 重復8一次,再12000rpm離心棄液體.
10. 50度烘干.
11. 去離子水溶解。
 
LiCl 抽提
1把樣品至置于離心管中,加4/5體積10M LiCl
2 室溫下靜置1分鐘
3 12000rpm離心5分鐘
4把液體轉移到另一離心管中
5.加2/3體積的異丙醇沉淀10分鐘
往下的步驟同于上面的8-12
 
E.coil總DNA的提取
1  將過夜培養的大腸桿菌離心去上清。
2  加500μl水重懸浮,加入500μl 2% SDS, 混合振蕩約1min,55℃溫育15min,直到溶液的粘度顯著下降。
3  加入0.1倍體積的3mol/L醋酸鈉(自然pH)。
4  加入150μl中性苯酚,混合振蕩均勻后,12000rpm離心5min,移取上清液,棄去白色中間層。
5  用中性苯酚/氯仿重復抽提直至看不見(或非常少)中間層為止,
6  加入1倍體積的異丙醇(或2倍體積的無水乙醇),上下顛倒混合直至出現白色絮狀DNA 沉淀團,用吸頭挑出DNA沉淀團。
7  用70%乙醇洗滌DNA沉淀團兩次。
8  烘干,溶解DNA沉淀。

 

上一篇:大腸桿菌DNA片段凝膠回收

下一篇:大腸桿菌目標蛋白的誘導及總蛋白檢測

首頁 | 關于龙8娱乐官方网站 | | 在線客服 | 聯系龙8娱乐官方网站
業務聯系電話
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
郵箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青島市城陽區錦匯路1號A2棟
產品技術咨詢
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它時段:13105190021
投訴與建議:13105190021 13006536294