苯酚/氯仿溶液抽提法
1. 接種5ml LB，37℃搖床過夜培養（12小時）
2. 離心，3000rpm，5min去上清
3. 振蕩混勻沉淀，分裝在2個離心管中，spin一下，吸去上清，加入150μl的溶液I （50mmol/L葡萄糖, 25mmol/L Tris•Cl(PH8.0), 10mmol/L EDTA(PH8.0) 在10lbf/in2（6.895×104Pa）高壓蒸氣下滅菌15min（8磅），貯存于4℃），劇烈振蕩5分鐘打散菌體（菌體不打散容易在產物中出現較多蛋白）。
4. 加入300μl溶液II（0.2mol/LnaOH, 1%SDS, 用2倍的溶液現配現用）后立即振蕩混合均勻，處理2分鐘后加入225μl溶液III（5mol/L乙酸鉀 60ml，冰乙酸 11.5ml，水 28.5ml）混合均勻，12000rpm離心5min，取上清液中于新的離心管。
5. 加120μl酸性苯酚/氯仿溶液，振蕩混勻，12000rpm離心5min，再取上清液中于新的離心管中。
6. 用120ul氯仿重復操作5。
7. 加等體積的異丙醇或2倍體積的乙醇，混勻，12000rpm離心7min。
8. 沉淀用70%乙醇洗滌兩次,每次10min。50℃烘干后加適量無菌去離子水（ddH2O）溶解，-20℃保存。
氯化鋰抽提法
1. 前四部同苯酚/氯仿溶液抽提法（用Solution I II III處理）
2. 加等體積的異丙醇，混勻，沉淀DNA，12000rpm離心7min。去上清，盡量去干凈。
3.用少量70％乙醇洗一下（洗去異丙醇），離心去盡酒精，50℃烘干沉淀，用適量ddH2O（100ul）充分溶解（可在50度水浴中助溶）后加入4/5體積的氯化鋰溶液（濃度約10mol/L）處理1min沉淀RNA和蛋白。
4.12000rpm離心5min，取上清液于新的離心管中，用等體積的異丙醇混勻，12000rpm離心8min，去上清。
5. 將沉淀用70%乙醇洗滌兩次,每次10min。50℃烘干后加一定量的無菌去離子水（ddH2O）溶解，-20℃保存。
酶連反應
一般采用10μl反應體系：
T4連接酶 1μl ，連接酶緩沖液1μl ，外源片段與載體按DNA 摩爾含量3:1加入即可。
如果是粘端連接，則需把外源片段和載體的混合物在50度處理10分鐘使粘端變性，然后立即放入冰中5分鐘。
平端連接采用14度，粘端連接采用16度，連接4小時以上（一般可過夜）。
＊外源片段與載體按DNA 摩爾含量為3:1或外源更多。
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