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微生物技術資料
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細菌培養檢測技術(1)



錄入時間:2011-6-1 10:19:32 來源:丁香園


 細菌的培養技術是微生物實驗中基本技術之一。大多數細菌均可用人工方法培養,只有將細菌培養出來才能對它進行研究和鑒定
  一.培養基的種類
  培養基(culture medium)是細菌生長繁殖所需要的各種營養物質的人工制品。適宜的培養基能使細菌在體外迅速生長繁殖,便于對細菌進行分離和鑒別。可分為基礎培養基、營養培養基、選擇培養基、鑒別培養基、厭氧菌用培養基和特殊培養基。
  (一)基礎培養基
  只含有細菌生長所需的最基本營養成分,應用最廣泛,為制備多種培養基的基礎,常見的有肉湯培養基、瓊脂培養基。
  (二)營養培養基
  在基礎培養基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有機物,可供營養要求較高的細菌生長需要或增菌用。如結核分枝桿菌培養基中添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。
  (三)選擇培養基
  利用不同種類細菌對化學物質的敏感性不同而制成,使分離菌大量繁殖而抑制其它細菌生長的培養基。培養基中含有的抑制劑能抑制非目的菌生長或使其生長不佳,有利于目的菌的檢出和識別。選擇培養基多為固體平板,用于從標本中分離某些特定的細菌。
  (四)鑒別培養基
  培養基中加有某些特定成分,如糖、醇類和指示劑等,用于檢查細菌的各種生化反應,以資鑒別和鑒定細菌。
  (五)厭氧菌用培養基
  專性厭氧菌須在無氧條件下才能生長,故需在培養基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸鈉等還原劑,降低培養基中氧化還原電勢,并應與外界空氣隔絕,使培養基本身為無氧的環境。
  (六)特殊培養基
  為某些需要在特殊條件下才能生長的細菌培養之用。如高滲鹽增菌培養基、高滲糖增菌培養基、改良 Kagan氏培養基等。
  二.培養基的制備
  制備一般培養基的主要過程基本相似,包括調配、溶化、調整 pH、過濾、分裝、滅菌及檢定和保存。
  三.細菌檢驗室的注意事項及無菌技術
  細菌培養必須隨時為防止污染和病原菌的擴散而進行操作,即無菌操作。細菌檢驗室的注意事項如下:
  1.細菌的培養應在接種罩或無菌室內進行。有條件的實驗室可在超凈工作臺內進行。
  2.用接種環分離和移種細菌時,用前用后均需滅菌處理。一般采用火焰滅菌法。
  3.從培養瓶或試管培養物中取標本或移種時,在打開瓶口、管口或關閉前,均要在火焰上通過2~3次。切不可將含菌材料污染臺面和其他物體。
  4.如不慎將試管等打破造成菌液污染時,不要驚慌,應立即報告負責人,然后用3%來蘇或5%石炭酸處理污染臺面或地面,至少浸泡30分種。
  5.工作完畢后,用紫外光燈照射30分鐘,或用3%來蘇擦拭臺面,并清洗雙手。
   四、接種環和接種針使用
  接種環和接種針由三部分組成,即環(針)部分、金屬柄部分和絕熱柄部分。接種環和接種針通常選用電熱(鎳)絲,環的直徑隨使用目的而不同,一般多為2~4mm,環和針的長度為40~50mm。
  接種環(針)使用前后均應進行滅菌處理,將接種環(針)末端直立火焰中,燒紅鎳絲部分,再使接種環(針)金屬柄旋轉通過火焰3次滅菌,冷卻后用以取菌或待試標本。使用接種環(針)完畢后立即將染菌的鎳絲部分于還原焰(內焰)中加熱,烤干環(針)端附著的細菌或標本,以免環(針)上殘余的細菌或標本因突受高熱,爆烈四濺,而污染環境和導致傳染危險。然后再移于氧化焰(外焰)中燒紅滅菌,最后將金屬柄部分往復在火焰中通過3次。用完后的接種環(針),應立即擱置于架上,切勿隨手棄置,以免灼焦臺面或其他物件。
 

 

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