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黃曲霉菌及其毒素的檢驗



錄入時間:2011-5-3 9:17:46 來源:食品伙伴網

黃曲霉毒素存在于霉變的花生、谷物、果仁和大米上。肝癌與黃曲霉毒素含量高有直接關系。為了防止產生黃曲霉毒素,最好將桃仁、果仁、谷物貯藏在密封和干燥的地方,不要吃發霉的食品,尤其是發霉的干果、桃仁和糧食。
 
(一)產毒菌及其特性
1. 黃曲霉菌  本菌屬真菌門、半知菌亞門叢梗孢科曲霉屬。本菌為需氧菌,最適溫度30~33℃,相對濕度80-90%為最佳條件。花生、玉米、大米和小麥是其較好的生長基質。
2. 寄生曲霉  寄生曲霉也是產生AFT的主要菌株,其特性與黃曲霉類似。我國分布較少。
3. 其他   青霉、毛霉和根霉等真菌也能產生AFT,但產毒量甚微,其特性與黃曲霉類似。
 
(二)黃曲霉毒素的種類及對食品的污染
黃曲霉毒素(AFT)是一類化學結構類似的化合物,均為二氫呋喃香豆素的衍生物。在紫外線照射下能產生熒光,根據熒光顏色不同,將其分為B族和G族兩大類及其衍生物。AFT目前已發現20余種。AFT主要污染糧油食品、動植物食品等;其中以花生和玉米污染最嚴重。家庭自制發酵食品也能檢出黃曲霉毒素,尤其是高溫高濕地區的糧油及制品種撿出率更高。
 
(三)黃曲霉毒素的特性
1、AFT的毒性極強    遠遠高于氰化物、砷化物和有機農藥的毒性,其中以B1毒性最大。當人攝入量大時,可發生急性中毒,出現急性肝炎、出血性壞死、肝細胞脂肪變性和膽管增生。當微量持續攝人,可造成慢性中毒,生長障礙,引起纖維性病變,致使纖維組織增生。AFT的致癌力也居首位,是目前已知最強致癌物之一。
2、AFT具耐熱性   一般烹調加工溫度不能將其破壞,裂解溫度為280℃。在水中溶解度較低,溶于油及一些有機溶劑,如氯仿和甲醇中,但不溶于乙醚、石油醚及乙烷。
3、食品中所污染的主要是黃曲霉毒素B1,其毒性目前一般認為有三種臨床特征:
(1)急性中毒:它是一種劇毒物質,毒性比KCN大100倍,僅次肉毒霉素,是目前已知霉菌毒素中毒性最強的。
(2)慢性中毒:長期攝入小劑量的黃曲霉毒素則造成慢性中毒。其主要變化特征為肝臟出現慢性損傷,如肝實質細胞變性、肝硬化等。出現動物生長發育遲緩,體重減輕,母畜不孕或產仔少等系列癥狀
(3)致癌性:AFT是目前所知致癌性最強的化學物質。A 致癌范圍廣,能誘發多種動物的實驗腫瘤;B 致癌強度大,其致癌能力比六六六大1萬倍;C 可誘發多種癌,AFT主要誘發肝癌,還可胃癌、腎癌、淚腺癌、直腸癌、乳腺癌,卵巢及小腸等部位的腫瘤,還可出現畸胎。
 
(四)檢驗
1. 黃曲霉菌菌落及形態觀察
黃曲霉菌菌落生長較快,10~14天,直徑3~4或6~7cm。菌落正面色澤也隨其生長由白色變為黃色及黃綠色,呈半絨毛狀。孢子成熟后顏色變為褐色。表面平坦或有放射狀溝紋,反面無色或帶褐色。在低倍顯微鏡下觀察可見分生孢子頭呈疏松放射狀,繼而為疏松柱狀。制片鏡檢觀察,可見分生孢子梗很粗糙。頂囊呈燒瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈鏈狀著生,分生孢子的周圍有小突起、球形、粗糙。
2. 黃曲霉毒素檢測方法    化學法、生物學方法和免疫學方法。
1)生物學方法
①抑菌試驗:巨大芽胞桿菌和短芽胞桿菌對AFT最敏感。通過平皿中抑菌圈大小來衡量AFT含量。
②熒光測定法 :AFT在紫外光照射下可發出熒光。將待檢菌株接種,28~30℃培養48~72h,檢查其特異熒光。此法操作簡便。對AFT最低檢出量為5pg/ml。
③大鼠試驗法:大鼠幼鼠對AFT最敏感,雄性幼鼠比雌性幼鼠敏感性更高,用100~150g大鼠作急性中毒試驗,一般3~4d死亡。
④雞胚試驗;
⑤鴨雛試驗:鴨雛對AFT非常敏感,致死性強,一般用一次劑量后72小時內死亡。
⑥斑點試驗:本法用于檢測真菌毒素致突變試驗的一種有意義的方法。主要利用沙門氏菌/微粒體突變性來檢測某些樣品種AFT的存在與含量。
2)免疫學方法
AFT是分子量為312~346的二氫呋喃香豆素的衍生物,無免疫原性,不能引起抗體的產生,故必須與大分子化學基團或蛋白質偶聯,成為完全抗原,方能引起免疫動物的抗體形成,然后利用血清學方法檢測AFT。由于AFT的量一般都較低,因此,檢測方法主要是敏感性較高的放射免疫測定法(RIA)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。近幾年來,國外已成功制備了測定B1的酶聯免疫測定盒及檢測乳中Ml含量的RIA檢測盒。這兩種檢測盒都十分方便,而且快速準確。

 

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