1 目的
1.1 了解化學因素對微生物生長的影響
1.2 掌握檢測pH值、化學藥劑對微生物生長影響的方法
2 原理
抑制或殺死微生物的化學因素種類極多，用途廣泛，性質各異。其中表面消毒劑和化學藥劑最為常見。表面消毒劑在極低濃度時，常常表現為對微生物細胞的刺激作用，隨著濃度的逐漸增加，就相繼出現抑菌和殺菌作用，對一切活細胞都表現活性。化學藥劑主要包括一些抗代謝物，例如抗生素等。在微生物實驗中，pH值的變化也對微生物生長有很大影響。
3 材料
3.1 菌種
大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、釀酒酵母菌、青霉菌、灰色鏈霉菌。
3.2 培養基
肉膏蛋白胨培養基、葡萄糖蛋白胨培養基、豆芽汁葡萄糖培養基、察氏培養基。
3.3 藥品
土霉素、新潔爾滅、復方新諾明、汞溴紅(紅藥水)、結晶紫液(紫藥水)。
3.4 其他物品
培養皿、無菌圓濾紙片、鑷子、無菌水、無菌滴管、水浴鍋、振蕩器、游標尺、分光光度計。
4 流程
4.1化學藥劑對微生物生長的影響
無菌培養皿→配菌懸液→滴加菌樣→倒平板→藥劑處理→培養→觀察結果
4.2不同pH對微生物生長的影響
配培養基→配菌懸液→接種→培養→觀察結果
5 步驟
5.1化學藥劑對微生物生長的影響
5.1.1配制菌懸液
取培養18—20h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌斜面各1支，分別加入4m1無菌水，用接種環將菌苔輕輕刮下、振蕩，制成均勻的菌懸液，菌懸液濃度大約為106cfu/mL。
5.1.2滴加菌樣
首先取3個無菌培養皿，每種試驗菌一皿，在皿底寫明菌名及測試藥品名稱。然后分別用無菌滴管加菌4滴(或0.2m1)菌液于相應的無菌培養皿中。
5.1.3制含菌平板
將融化并冷卻至45—50℃的肉膏蛋白胨培養基傾入皿中約12ml～15m1，迅速與菌液混勻，冷凝備用。
5.1.4化學藥劑處理
用鑷子取分別浸泡在土霉素、復方新諾明、新諾爾滅、紅汞和結晶紫藥品溶液中的圓濾紙片各一張，置于同一含菌平板上。
5.1.5培養
片刻后，將平板倒置于37℃溫箱中，培養24h。
5.1.6觀察結果
觀察抑菌圈，并記錄抑菌圈的直徑。
5.2不同pH對微生物生長的影響
5.2.1配制培養基
肉膏蛋白胨液體培養基（標記A），配制豆芽汁葡萄糖液體培養基（標記B），分別調pH至3、5、7、9和ll，每pH值培養基3管，每管盛培養液5m1，滅菌備用。
5.2.2配置菌懸液
取培養18—20 h的大腸桿菌、釀酒酵母菌斜面各1支，加入無菌水4ml，制成菌懸液。
5.2.3接種與培養
A培養基中接種大腸桿菌液l滴(或0.1毫升)、搖勻，置37℃溫箱中培養24h。B培養基接種1滴(或o．1m1)，搖勻，置28℃溫箱中培養24h。
5.2.4觀察結果
根據菌液的混濁程度判定微生物在不同pH生長情況。
6 思考
6.1上述多個試驗中，為什么選用大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯革芽孢桿菌作為試驗菌?
6.2說明青霉素和鏈霉素的作用原理。
6.3通過實驗說明芽孢的存在對消毒滅菌有什么影響?
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