1 目的

1.1 了解細菌生長曲線特點及測定原理

1.2 學習用比濁法測定細菌的生長曲線 

2 原理

    將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養基中，在適宜的條件下進行培養，定時測定培養液中的菌量，以菌量的對數作縱坐標，生長時間作橫坐標，繪制的曲線叫生長曲線。它反映了單細胞微生物在一定環境條件下于液體培養時所表現出的群體生長規律。依據其生長速率的不同，一般可把生長曲線分為延緩期、對數期、穩定期和衰亡期。這四個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線，可了解各菌的生長規律，對于科研和生產都具有重要的指導意義。

    測定微生物的數量有多種不同的方法，可根據要求和實驗室條件選用。本實驗采用比濁法測定，由于細菌懸液的濃度與光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度，并將所測的OD值與其對應的培養時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線，此法快捷、簡便。

3 材料

3.1菌種

    大腸桿菌

3.2培養基

   肉膏蛋白胨培養基

3.3 儀器和器具

    721分光光度計，比色杯，恒溫搖床，無菌吸管，試管，三角瓶。

4 流程

    種子液→標記→接種→培養→測定

5 方法  

5.1種子液制備

    取大腸桿菌斜面菌種1支，以無菌操作挑取1環菌苔，接入肉膏蛋白胨培養液中，靜止培養18h作種子培養液。

5.2標記編號

    取盛有50mL無菌肉膏蛋白胨培養液的250mL三角瓶11個，分別編號為0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。

5.3接種培養

    用2mL無菌吸管分別準確吸取2mL種子液加入已編號的11個三角瓶中，于37℃下振蕩培養。然后分別按對應時間將三角瓶取出，立即放冰箱中貯存，待培養結束時一同測定OD值。

5.4生長量測定

    將未接種的肉膏蛋白胨培養基傾倒入比色杯中，選用600nm波長分光光度計上調節零點，作為空白對照，并對不同時間培養液從0h起依次進行測定，對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養基適當稀釋后測定，使其OD值在0.10.～0.65以內，經稀釋后測得的OD值要乘以稀釋倍數，才是培養液實際的OD值。

6 結果

6.1 將測定的OD值填入下表：

時　間(h)      對照    0    1.5    3    4    6      8    10    12    14      16    20

光密度值（OD600）                                                

6.2 以上述表格中的時間為橫坐標，OD600 值為縱坐標，繪制大腸桿菌的生長曲線。

7 思考

1 用本實驗方法測定微生物生長曲線，有何優點？

2 若同時用平板計數法測定，所繪出的生長曲線與用比濁法測定繪出的生長曲線有何差異？為什么？