1 目的
1.1 了解酸乳中乳酸菌分離原理
1.2 學習并掌握酸乳中乳酸菌菌數的檢測方法。
2 原理
活性酸奶需要控制各種乳酸菌的比例,有些國家將乳酸菌的活菌數含量作為區分產品品種和質量的依據。
由于乳酸菌對營養有復雜的要求,生長需要碳水化合物、氨基酸、肽類、脂肪酸、酯類、核酸衍生物、維生素和礦物質等,一般的肉湯培養基難以滿足其要求。測定乳酸菌時必須盡量將試樣中所有活的乳酸菌檢測出來。要提高檢出率,關鍵是選用特定良好的培養基。采用稀釋平板菌落計數法,檢測酸奶中的各種乳酸菌可獲得滿意的結果。
3 材料
3.1培養基
MRS培養基,改良CHALMERS培養基,M17培養基。
3.2 儀器和器具
無菌移液管(25ml,1ml),無菌水(225ml帶玻璃珠三角瓶,9ml試管),無菌培養皿,旋渦均勻器。
恒溫培養箱。
4 流程
酸奶→稀釋→制平板→培養→檢查計數
5 方法
5.1 樣品稀釋
先將酸奶樣品攪拌均勻,用無菌移液管吸取樣品25ml加入盛有225ml無菌水的三角瓶中,在旋渦均勻器上充分振搖,務必使樣品均勻分散,即為10-1的樣品稀釋液,然后根據對樣品含菌量的估計,將樣品稀釋至適當的稀釋度。
5.2 制平板
選用2~3個適合的稀釋度,培養皿貼上相應的標簽,分別吸取不同稀釋度的稀釋液1ml置于平皿內,每個稀釋度作2個重復。然后用溶化冷卻至46℃左右的MRS或改良CHALMERS培養基倒平皿,迅速轉動平皿使之混合均勻,冷卻成平板。
5.3 培養和計數
將平皿倒置于40℃恒溫箱內培養24~48h,觀察長出的細小菌落,計菌落數目,按常規方法選擇30~300個菌落平皿進行計算。
6 結果
6.1 指示劑顯色反應
乳酸菌的菌落很小,1~3mm,園形隆起,表面光滑或稍粗糙,呈乳白色、灰白色或暗黃色。由于產酸菌落周圍能使CaCO3產生溶解圈,酸堿指示劑呈酸性顯色反應。
6.2 鏡檢形態
必要時,可挑取不同形態菌落制片鏡檢確定是乳桿菌或乳鏈球菌。保加利亞乳桿菌呈桿狀,成單桿、或雙桿菌或長絲狀。嗜熱鏈球菌,呈球狀,成對、或短鏈、或長鏈狀。
6.3 參照比較
據介紹,改良CHALMERS培養基的檢出率較MRS培養基高,M17培養基較適合于乳球菌的培養,在檢測時可同時使用多個培養基作比較。
7 思考
1 為什么乳酸菌的檢測關鍵是選用特定良好的培養基?
2 培養基中為什么要加CaCO3?
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