【摘要】 目的  通過試驗確定頭孢哌酮鈉細菌內毒素的具體檢測方法 方法  選擇相應靈敏度的鱟試劑，進行干擾試驗，研究細菌內毒素檢查方法。結果  用靈敏度0.125EU/ml的鱟試劑，同時將供試品2倍稀釋，進行細菌內毒素檢查，沒有出現干擾作用。 結論  頭孢哌酮鈉的熱原檢查可用細菌內毒素檢測法。

   

    頭孢哌酮鈉屬于β-內酰胺類抗生素，臨床上主要用于治療革蘭陰性菌、綠膿桿菌引起的呼吸系統、泌尿系統的感染。《中國藥典》2000年版頭孢哌酮鈉的熱原檢查仍采用家兔法， 了探討其細菌內毒素檢查方法，本文參照《中國藥典》的要求，通過干擾試驗，確立了頭孢哌酮鈉的細菌內毒素檢查方法。

    鱟試劑（TAL，批號:0312081，靈敏度:0.125EU/ml，規格:0.1ml/支，湛江安度斯生物有限公司）;細菌內毒素檢查用水（BET水，批號:0403080，規格:5ml/支，湛江安度斯生物有限公司）;細菌內毒素工作標準品（CSE，批號:0401170，規格:12EU/支，湛江安度斯生物有限公司）;頭孢哌酮鈉（供試品，批號:31820907，31820204，31820610，珠海聯邦制藥廠生產）;BET-40細菌內毒素檢查儀;ZH-2自動旋渦混合器。

    2.1 TAL靈敏度的復核 按《中國藥典》附錄 ［1］ 細菌內毒素檢查法進行復核，結果見表1，表明標示靈敏度為0.125EU/ml的TAL符合規定。

    表1 鱟試劑靈敏度的復核 內毒素濃度（略）

    2.2 細菌內毒素限值（L）的確定 ［2］  按公式L=K/M，式中K為規定給藥途徑，即人用每公斤體重每小時最 可接受的內毒素劑量，注射劑K=5.0EU/（kg·hr）;M為人用每公斤體重每小時最大劑量，以ml/（kg·hr）、mg/（kg·hr）、U/（kg·hr）表示，人均體重按60kg計算，注射時間小于1h按1h計算。參考藥師手冊 ［3］，M=100mg/（kg·hr），計算內毒素限值L=0.05EU/mg。

    2.3 供試品的干擾預試驗

    2.3.1 內毒素及供試品的稀釋 用BET水將CSE稀釋成0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml濃度的內毒素備用;根據最大有效稀釋倍 MVD=CL/λ，L為供試品的細菌內毒素限值，λ為本次試驗選用的鱟試劑的靈敏度;C為供試品溶液的濃度5mg/ml，由此計算得最大有效稀釋倍數MVD為2倍。對于靈敏度0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml的鱟試劑，頭孢哌酮鈉選擇稀釋倍數分別為1、2、4、8倍，用BET水將1批供試品（批號31820907）稀釋成以上4 濃度備用。

    2.3.2 干擾預試驗 取10支靈敏度為0.125EU/ml的鱟試劑，其中5支做供試品陰性對照（NPC）系列反應;另外5支做供試品陽性對照（PPC）系列反應。試驗結果見表2。表明供試品陰性對照液系列反應全部陰性。供試品陽性對照液在供試品稀釋倍數<2時為陰性，≥2時為陽性。表明供試品在較高濃度時對細菌內毒素有抑制干擾作用，而供試品至少2倍稀釋并選用靈敏度為0.125EU/ml的鱟試劑則無干擾作用。

    表2 頭孢哌酮鈉預試驗結果 供試品（略）

    2.4 供試品干擾試驗 用細菌內毒素檢查用水和稀釋2倍的3批供試品分別將同 支細菌內毒素工作標準品制成含細菌內毒素工作標準品0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml、0.03EU/ml4 濃度的內毒素溶液，每一濃度平行做4支，另取細菌內毒素檢查用水和供試品溶液各2支作為水溶液陰性對照管和供試品陰性對照管.分別對31820907、31820204、318206103批樣品做干擾試驗。結果見表3。表 明λc=λs=0.125EU/ml，即λc、λs都在0.5～2λ范圍內，表明供試品經2倍稀釋，使用靈敏度0.125EU/ml的鱟試劑對細菌內毒素無干擾，進一步驗證了預實驗的結果。

    表3 供試品干擾試驗結果 內毒素濃度（略）

    2.5 細菌內毒素檢查 根據《中國藥典》細菌內毒素檢查法，將3批供試品2倍稀釋，與0.125EU/ml鱟試劑進行細菌內毒素檢測，并同時進行3批供試品的家兔熱原對比試驗，均符合藥典對其有效性的規定。

    3.1 干擾預試驗的目的是評價供試品濃度對鱟試劑與細菌內毒素凝集反應的干擾程度，以便初步篩選出其干擾試驗的起始濃度。 樣既可以避免干擾試驗的盲目性，同時又節省了大量的時間和鱟試劑，降低了成本，提高了工作效率。

    3.2 熱原檢查可用細菌內毒素檢查代替家兔法，檢查時只要將其稀釋，選擇相應靈敏度的鱟試劑即可進行。

    3.3 通過試驗表明，頭孢哌酮鈉熱原檢查可用細菌內毒素檢查法代替傳統的家兔法，檢查時只要將其至少2倍稀釋，選擇相應靈敏度的鱟試劑，即可進行。該法與傳統的家兔熱原法相比，具有操作簡便快捷，結果準確，檢測靈敏高，實用性強等優點。

 

    1 國家藥典委員會.中國藥典，北京:化學工業出版社，2000年版（二部）:附錄XIE.

    2 夏振民.藥品細菌內毒素檢查的限值.藥物分析雜志，1995，15（3）:54.

    3 裘學友，孫定人，喻維新.藥師手冊，北京:人民軍醫出版社，1999，323.