近年來各種抗生素的大量應用，尤其廣譜抗生素的濫用，造成耐藥突變菌株的大量出現，經驗用藥失敗率高，大劑量用藥易造成藥物中毒。檢測病原微生物對抗生素的敏感性是臨床微生物實驗室最重要的任務之一；其目的是指導臨床上治療某個病人選擇最佳的抗生素，避免由于用藥不當，產生耐藥菌株。由于新的病原體和新的耐藥機制的出現，對實驗室的藥敏提出了更高的要求：必須提供準確的數椐，作為臨床治療的參考。以下就藥敏方法、實驗操作、結果報告加以討論。

 

　　目前臨床微生物實驗室進行藥敏試驗的方法主要有紙片擴散法、稀釋法、抗生素濃度法、自動化儀器等。許多臨床實驗室使用紙片擴散法作為常規的藥敏試驗，其優點是：操作簡單，重復性好，成本低，能根據臨床需要選用抗生素，藥敏結果解釋（敏感、耐藥、中介）易為臨床醫生理解，缺點是不適用于生長緩慢的菌株及一些苛養菌；稀釋法是一種可靠的標準化的方法，可作為評價其他藥敏試驗方法的參考方法，也可準確地檢測一些紙片擴散法檢測不出的苛養菌、非發酵菌和厭氧菌，稀釋法的主要缺點是操作繁瑣；抗生素濃度法的成本太高，不適合常規試驗應用；自動化儀器需要儀器才能進行。以下主要討論紙片抗散法。

 

　　1原理

 

　　紙片擴散法是將含有定量抗生素的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴散，隨著擴散距離的增加抗生素的濃度呈對數減少,在藥物濃度到達的范圍內對此藥敏感的細菌不能生長而形成透明的抑菌圈，不同細菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了測試菌對該藥的敏感程度。

 

　　2藥敏紙片

 

　　生物公司提供，應保存于2 ℃~8 ℃或-14 ℃以下，β內酰胺類抗生素的紙片應密封冷凍保存以保持效力，紙使用前應取出平行至室溫以減少冷凝，紙片應在有效期內使用，用后放回冰箱保存。

 

　　3瓊脂培養基

 

　　NCCLS推薦使用MH培養基，其優點如下：絕大多數非苛養菌生長良好，批間重復試驗較好，對磺胺、甲氧芐啶和四環素的抑制少。MH培養基可購買成品或干粉培養基，評價一批新的MH培養基時，需用甲氧芐啶/磺胺甲惡唑紙片來檢測腸球菌ATCC33186的敏感性，合格的培養基應產生20 mm的抑菌圈，若質量有問題則會產生直徑小于20 mm的抑菌圈或無抑菌圈等，不能用加有羊血的MH培養基進行常規的藥敏試驗，這會導致某些菌種抑菌圈的改變。

 

　　4操作方法

 

　　應用KB法劃線接種，用滅菌棉試蘸取試驗菌涂抹在MN培養基表面，要均勻涂抹3次，每次應轉動60度，放置室溫數分鐘待干燥后以無菌鑷子取各抗生素紙片貼于表面，各紙片間距為15 mm,紙片一經貼入藥物會立即擴散，因此紙片放入后不能再移動，貼好后15 min內放入35 ℃溫箱，同時因藥敏解釋標準是建立在空氣培養基礎上的，某些藥物如氨基糖苷類、四環素、大環內酯類易受CO2的影響而有較大改變，故常規藥敏試驗不應放于CO2溫箱中。

 

　　5結果

 

　　報告一般細菌的藥敏24 h即可作出報告，合格的藥敏應是平皿內細菌生長的平面是連續的，若可見明顯單個菌落生長則是接種菌液濃度太小，需重新接種；抑菌圈可用直尺讀最近的整毫米數，當檢測葡萄球菌或腸球菌，在周圍的抑菌圈內有明顯菌落生長，則提示耐藥，其他細菌有此現象，則可能是菌種不純，需重新試驗；變形桿菌屬的菌株會長于藥物的抑菌圈內，若明顯的抑菌圈內有薄膜樣爬行生長可以忽略；對鏈球菌應測其抑菌圈而不是溶血圈；如何發出藥敏結果的報告是很重要的，目前藥敏結果的報告形式有兩種：解釋性分類報告（即敏感、中介和耐藥）和定量MIC值報告，若報告MIC值時需同時附上解釋性分類報告；需要強調的是某些菌種或菌群在進行藥敏試驗時對抗生素的選擇和報告有特殊要求；產超廣譜β內酰胺酶（ESBLS）的菌株在常見的體外藥敏試驗中，對氧米諾頭孢菌素和氨曲南等抗生素表現為中敏、部分敏感甚至全部敏感，而在感染患者體內表達為臨床意義的耐藥，由此造成治療的失敗；NCCLS規定對于腸球菌屬：頭孢菌素、氨基糖苷類（篩選高水平面耐藥除外）、克林霉素和甲氧芐啶/磺胺甲惡唑可以在體外顯示活性而臨床上無效，故這些藥敏不應報告為敏感；對于甲氧西林耐藥的葡萄球菌（MRS）應報告對所有β內酰胺類、氨基糖苷類、大環內酯類、克林霉素和四環素耐藥；對于沙門氏菌屬和志賀菌屬的分離株只有氨芐西林、一種喹諾酮類藥物和磺胺甲惡唑/甲氧芐啶可用于常規試驗的報告,一、二代頭孢菌素和氨基糖苷類等體外有可能有活性,但治療卻無效所以上述藥物不應報告為敏感。總之藥敏試驗的結果應以臨床治療為目的。

作者：何衛恒，段純，汪崇，梁綺文 （深圳市婦幼保健院，廣東 深圳 518028）