【摘要】  　　目的通過初步篩選發現石蓮子提取具有較好的抑菌活性，探討石蓮子不同溶劑提取物的抑菌作用。方法制備石蓮子不同溶劑提取物，采用打孔瓊脂擴散法和稀釋法對石蓮子不同溶劑提取物進行抑菌實驗研究。結果實驗數據表明石蓮子的不同溶劑提取物對供試的細菌和部分真菌（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、藤黃微球菌、綠膿桿菌、糞鏈球菌以及黃霉菌）均有一定程度的抑制效果，且不同溶劑提取物對各種供試菌的抑菌活性不同。結論石蓮子的不同溶劑提取物對部分細菌和真菌有一定程度的抑制效果，這將為進一步全面開發石蓮子提供基礎。

【關鍵詞】  石蓮子 抑菌 最小抑菌濃度 抑菌圈

　

　　Abstract:ObjectiveThis research intended to study the antibacterial activities of different solvents extracts of nelumbo nucifera Gaertn.MethodsVarious extracts were prepared from Nelumbo nucifera Gaertn,and the the minimal inhibitory concentration(MIC) and inhibitory circle of the extract were determined.ResultsThe results showed that the antibacterial activity of the extracts was different toward different microbes.ConclusionThe experimental date demonstrated that extracts of nelumbo nucifera Gaertn exhibited strong antibacterial activities. This research is benefit for further study and use of the Nelumbo nucifera Gaertn.

　　Key words:Nelumbo nucifera Gaertn;   Antibacterial;   MIC；  Inhibitory circle

　　石蓮子又稱為甜石蓮、蓮實、殼蓮子、帶皮蓮子, 來源于睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn的成熟果實，英文名為NELUMBINIS LB［1］。本品為橢圓形，兩端略尖，長1.8 cm左右，直徑約1.2 cm。外殼灰黑色，表面平滑，一端有小圓凹點，另一端有微小短柄，殼厚約1 mm內含蓮子1枚。質堅硬，不易破裂［2］。石蓮子具有補益脾胃、祛熱毒、清心除煩的功效，可用于緩解和治療冷熱嘔吐、食物不下、淋濁等癥狀［3］。據報道，從石蓮子中提取的蓮心堿具有降壓、抗心率失常等作用［4］，而石蓮子在抑菌方面的研究卻未見報道。本研究在初步篩選中發現石蓮子具有較好的抑菌活性，為充分發掘石蓮子的市場潛力，開發其可利用性，本文對石蓮子不同溶劑浸提得到的各提取物對常見致病革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌及黃霉菌的體外抑菌活性進行了研究，為闡明其抗菌特性以及進一步開發這一新資源提供參考。

　　1  器材與方法

　　1.1  材料與儀器

　　1.1.1  材料石蓮子購于貴州省藥材公司，產地：廣西，包裝批號060702。

　　1.1.2  試劑石油醚，醋酸乙酯，甲醇，乙醇，95%乙醇，二甲基甲酰胺，均為分析純, 購于貴陽中興化學試劑公司。

　　1.1.3  菌種購自中國微生物菌種保藏中心，金黃色葡萄球菌staphylococcus aureus；大腸桿菌Escherichia coli；糞鏈球菌Enterococcus faecalis；黃霉菌Aspergillus flavus；綠膿桿菌Pseudomonas aeruginosa；藤黃微球菌Micrococcus luteus。

　　1.1.4  培養基MRS固體培養基：酪蛋白胨10   g，牛肉提取物10 g，酵母提取物5 g，葡萄糖5 g，乙酸鈉5 g，檸檬酸二銨2.0 g，Tween80 1.0 g，磷酸氫二鉀2.0 g，MnSO4·H2O 0.2 g，MgSO4·7H2O 0.05 g，CaCO3 20.0g，瓊脂15 g， 定容至1 000 ml，pH值 調至6.8；營養肉湯固體培養基：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化鈉5 g，瓊脂15 g，定容至1 000 ml，pH值 調至7.0；查氏固體培養基：硝酸鈉3 g，磷酸氫二鉀1.0 g，MgSO4·7H2O 0.05 g，蔗糖30 g，瓊脂15 g，液體培養基組成除了不加瓊脂外，與相應的固體培養基相同。

　　1.1.5  儀器高低溫恒溫培養箱（上海一恒科技有限公司），旋轉蒸發儀（BUCHI R-200），SHZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限公司），電子天平（OHAUS）凈化工作臺（上海市純昱科學儀器有限公司），真空冷凍干燥機（LABCONCO），超低溫冰箱（Forma Scientific），雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司TU-1901）。

　　1.2   方法

　　1.2.1  石蓮子不同溶劑提取物的制備將干燥的石蓮子粉碎過40目篩，稱取等量的石蓮子3份，每份150 g，分別置于1 000 ml的水、酒精、醋酸乙酯中。每種溶劑浸泡3次，每次置于恒溫（37℃）揺床上（200 r/min）振蕩12 h，抽濾得到提取液。水的提取液于-80℃冷凍過夜后用真空冷凍干燥機干燥；酒精提取液40℃減壓旋轉濃縮除去酒精，于-80℃冷凍過夜后用真空冷凍干燥機干燥；醋酸乙酯提取液先減壓濃縮除去醋酸乙酯，得浸膏。

　　1.2.2  對各部分粗提物的抑菌活性檢測菌種培養：金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus），大腸桿菌（Escherichia coli），綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa），藤黃微球菌（Micrococcus luteus）采用營養肉湯培養基（組成成分見上）活化培養，糞鏈球菌（Enterococcus faecalis）采用MRS培養基（組成成分見上）活化培養，黃曲霉（Aspergillus flavus）采用查氏培養基（組成成分見上）活化培養，分別將各菌種濃度調至OD600約為1，待用。

采用試管稀釋法對最低抑菌濃度（MIC）的測定：取上述得到的水和酒精溶劑的粗提物0.1 g, 溶于1 ml無菌水中，醋酸乙酯溶劑的提取物0.1 g溶于1 mlDMF，使其充分溶解，用細菌過濾器過濾，取0.3 ml樣品溶液以相應的液體培養基倍比稀釋成樣品濃度分別為50, 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.57, 0.79 mg/ml，分別在試管中加入30 μl菌液，置于37℃恒溫培養16 h。分別取100 μl菌懸液均勻涂板。然后放37℃溫箱靜止培養24 h后取出， 每梯度涂布3個平板，整個過程重復兩次，測定最小抑菌濃度（MIC），篩選出抑菌活性最強的組分［5］。

　　抑菌圈的測定方法：取各溶劑的浸提物30 mg，分別用相應的溶劑（無菌水，乙醇，醋酸乙酯）1 ml，制成30 mg/ml樣品溶液，用細菌過濾器過濾。在相應的固體培養基平板上加0.1 ml菌液，均勻涂布。稍干后用8 mm打孔器打孔，每孔加0.1 ml樣品，37℃培養24 h，測量抑菌圈大小。

　　2  結果

　　2.1  石蓮子不同溶劑提取物MIC比較抑菌實驗結果見表1。采用試管稀釋法對石蓮子3種溶劑提取物的最低抑菌濃度的進行測定，結果表明石蓮子的3種溶劑提取物對供試菌具有不同的抑制作用：表1  石蓮子不同溶劑提取物各組分的最低抑菌濃度（略）

　　水溶劑浸提物對藤黃微球菌有很明顯的抑制作用，最低抑菌濃度為6.25 mg/ml；對金黃色葡萄球菌、黃曲霉的抑制效果較好，最低抑菌濃度均為12.5 mg/ml；對大腸桿菌、綠膿桿菌的抑制效果稍差，最低抑菌濃度為25 mg/ml；對糞鏈球菌的最低抑菌濃度為50 mg/ml。

　　乙醇溶劑浸提物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、藤黃微球菌、綠膿桿菌的抑制作用較好，最低抑菌濃度均為12.5 mg/ml；對其它的供試菌的抑制效果稍差，對糞鏈球菌和黃曲霉的最低抑菌濃度為25 mg/ml。

　　醋酸乙酯溶劑浸提物對黃曲霉抑菌活性顯著，最低抑菌濃度為6.25mg/ml；對其它的供試菌的抑制效果稍弱，對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌的最低抑菌濃度均為25 mg/ml；對大腸桿菌、藤黃微球菌和糞鏈球菌的最低抑菌濃度為50 mg/ml。

　　從各種供試菌對石蓮子浸提物的敏感性上來看，不同菌種對不同溶劑提取物的敏感性不同：黃曲霉對石蓮子醋酸乙酯提取物很敏感，最低抑菌濃度為6.25 mg/ml；綠膿桿菌對石蓮子的酒精的提取物較為敏感，最低抑菌濃度為12.5 mg/ml；金黃色葡萄球菌對石蓮子的水和酒精的提取物均較為敏感，最低抑菌濃度為12.5 mg/ml；大腸桿菌對石蓮子的酒精提取物較為敏感，最低抑菌濃度為12.5 mg/ml；藤黃微球菌對石蓮子的水提取物很敏感，最低抑菌濃度為6.25 mg/ml；糞鏈球菌對石蓮子的酒精提取物較為敏感，最低抑菌濃度為25 mg/ml。

　　2.2  不同溶劑提取物的抑菌圈結果抑菌實驗結果見表2。石蓮子不同溶劑提取物對各種供試菌的抑菌活性不同。石蓮子醋酸乙酯溶劑的提取物對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、藤黃微球菌和黃霉菌的抑制效果較強，抑菌圈直徑均大于10 mm；石蓮子水浸提物對金黃色葡萄球菌，藤黃微球菌和黃霉菌的抑制效果較強，抑菌圈直徑均大于10 mm；石蓮子乙醇浸提物對大腸桿菌的抑制效果較強，抑菌圈直徑等于10 mm。表2  石蓮子不同溶劑提取物抑菌圈直徑（略）

　　3  討論

　　近年來，有關石蓮子和其中的有效成分蓮心堿的研究很多，涉及到各個方面［6］，但石蓮子具有抗菌作用卻一直未見報道。本研究對石蓮子的水、乙醇以及醋酸乙酯提取物的抑菌作用進行了研究，為全面開發石蓮子的藥用價值提供研究基礎。

本研究采用體外微生物敏感實驗測定方法，評價和比較了石蓮子不同溶劑提取物的體外抑菌效果，實驗結果表明石蓮子不同溶劑提取物均有明顯的體外抑菌作用，且不同溶劑提取物對各種供試菌的抑菌活性不同，這很可能意味著有不同的化合物具有抑菌作用，下一步的研究工作龙8娱乐官方网站將對其進行活性指導下的活性化合物的進一步分離純化。

作者：周英，段震，李純純，黃赤夫《時珍國醫國藥》

  　　［1］Cui Shude, Traditional Chinese medicine collected works［M］, Hei Longjiang science and technology publishing company in Ha Erbin,637.

　　［2］李雅文，郝金德.石蓮子與苦石蓮應區別藥用［J］.時珍國醫國藥,2004,15(4):229.　　

　　［3］蒲有能，衛愛黎.石蓮子的民間用法及成分初探［J］.中國民族民間醫藥雜志,1998,2：20.

　　［4］Ling ZQ, Xie BJ, Yang EL. Isolation, characterization, and determination of antioxidative activity of oligomeric procyanidins from the seedpod of Nelumbo nucifera Gaertn［J］. J Agric Food Chem. 2005，53(7)：2441.

　　［5］Ping Shen, Fan Xiurong,.Microbiology experiment(the third edition)［M］.Advanced education publishing company of Beijing,1996：2.

［6］許磊，姚崇舜，陳濟民.蓮心堿的研究概況［J］.中草藥,2000,12：956.