一、培養材料的采集 

    組織培養所用的材料非常廣泛，可采取根、莖、葉、花、芽和種子的子葉，有時也利用花粉粒和花藥，其中根尖不易滅菌，一般很少采用。 

    對于木本花卉來說，闊葉樹可在一、二年生的枝條上采集，針葉樹種多采種子內的子葉或胚軸，草本植物多采集莖尖。 

    在快速繁殖中，最常用的培養材料是莖尖，通常切塊在0.5厘米左右，如果為培養無病毒苗而采用的培養材料通常僅取莖尖的分生組織部分，其長度在0.1毫米以下。 

二、培養材料的消毒 

（一）先將材料用流水沖洗干凈，最后一遍用蒸餾水沖洗，再用無菌紗布或吸水紙將材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小塊。 

（二）在無菌壞境中將材料放入70％灑精中浸泡30－60秒。 

（三）再將材料移入漂白粉的飽和液或0.01％升汞水中消毒10分鐘。 

（四）取出后用無菌水沖洗三、四次。 

三、制備外植體 

    將已消毒的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌的環境下，剝去芽的鱗片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，這就是外植體。在操作中嚴禁用手觸動材料。 

四、接種和培養 

（一）接種　 

　　在無菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養基上，每瓶接種4－10個。 

（二）封口　 

　　接種后，瓶、管用無菌藥棉或蓋封口，培養皿用無菌膠帶封口。 

（三）溫度　 

　　培養基大多應保持在25℃左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區別對待。 

（四）增殖　 

    外植體的增殖是組培的關鍵階段，在新梢等形成后為了擴大繁殖系數，需要繼代培養。把材料分株或切段轉入增殖培養基中，增殖培養基一般在分化培養基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1個月左右后，可視情況進行再增殖。 

（五）根的誘導　 

    繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒有根，必須轉到生根培養基上進行生根培養。1個月后即可獲得鍵壯根系。 

五、組培苗的練苗移栽 

    試管苗從無菌到光、溫、濕穩定的環境進入自然環境，必須進行煉苗。一般移植前，先將培養容器打開，于室內自然光照下放3天，然后取出小苗，用自來水把根系上的營養基沖洗干凈，再栽入已準備好的基質中，基質使用前最好消毒。移栽前要適當遮蔭，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98％左右），但基質不宜過濕，以防爛苗。

 

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