(1) 將酵母細胞培養在3ml選擇性培養基中,
(2) 稀釋過夜培養的菌液,重新在10ml培養基中培養細胞。
(3) OD600達到1.0時,收菌,4000rpm/min離心5min,棄培養基。
(4) 將細胞懸浮于400μl AE緩沖液(
(5) 加入1/10體積的10% SDS,充分混合。
(6) 加入等體積在
(7)
(8) 在室溫下8000rpm/min離心10min。
(9) 取水相,加入等體積的酚/氯仿/異戊醇(25∶24∶1),10000rpm/min離心8min。
(10) 取水相,加入等體積氯仿/異戊醇(49∶1)10000rpm/min離心8min。
(11) 加入1/10體積
(12) 沉淀樣品于
(13) 在冰上干燥RNA(放置15min),最后用適量DEPC水溶解RNA。
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