2、細菌保存于含有甘油的培養物中：

（1）在液體培養基中生長的細菌培養物：取0.85ml細菌培養物，加入0.15ml?高壓滅菌甘油，振蕩培養物使甘油分布均勻，然后轉移到標記好的保存管內，密封，在乙醇－干冰或液氮中凍結后再轉至－70?度長期保存。在復蘇時，用滅菌接種針刮取凍結的培養物表面，然后立即把黏附于接種針上的細菌劃于含適當抗生素的LB瓊脂平板表面，于37度過夜。

（2）在瓊脂平板上生長的細菌培養物：從瓊脂平板表面刮下細菌放入裝有2mlLB的無菌試管內，再加入等量的含有30％滅菌甘油的LB?培養基，振蕩使甘油完全分布均勻后，分裝于無菌保存管內，密封，再按前述方法冰凍保存。這一方法的優點在于可用于保存在質粒載體上建立的cDNA文庫。

??如果甘油與培養基混合后凍存在一般冰箱的冰凍室里，不能反復復蘇使用，而且如果甘油含量太低，凍結成冰塊，復蘇效果不佳。一般都使用甘油終濃度為30%。

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