【實驗目的】

1、掌握單染色的操作技術

2、觀察細菌的基本形態

【實驗原理】

?單染色即用單純的種染料進行染色，多數采用美藍、結晶紫或石碳酸復紅等堿性染料。此法僅能顯示細胞的外部形態，而不能辨別其內部結構。

?染色前必須將細胞固定，其目的是殺死細菌，并使它粘附在載玻片上。此外，還可以增加菌體對染料的親和力。常用的有加熱和化學固定兩種方法。無論用哪種方法都應盡量使細菌維持原有的形態，防止細胞膨脹或收縮。

【實驗材料、藥品及器具】

1、菌種  大腸桿菌（Escherichia coli）

枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）

2、染色液  石炭酸品紅染色或結晶紫染色液（Stining Solutions）

3、無菌水

4、洗瓶裝蒸餾水

5、洗凈的載玻片（Slicle）5片

6、顯微鏡、香柏油、接種環、酒精燈、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯

【實驗步驟】

1?、涂片：取一片干凈無油載玻片，在其中央滴一滴無菌水，然后用接種環以無菌操作方法取少許培養好的大腸桿菌，放在載玻片的水滴中涂勻，注意菌量不宜過多，否則，不易看清單個菌體。

2、固定：將涂好的玻片在空氣中風干或火焰上通過3～4次，使水份蒸發，此時細菌菌體緊貼在玻片上。

3、染色：用石炭酸品紅或結晶紫染色劑30~60S?，然后用洗瓶輕輕沖洗染色劑（注意不要直接沖洗染色部位），直至無多余的染液，晾干或用吸水紙從旁吸干或用微火烘干。

4、用同樣方法將枯草芽孢桿菌制作一張涂片。

5、鏡檢：首先在低倍鏡下找到物像，然后在涂膜中央滴一滴香柏油，換成油浸鏡觀察兩個菌種的形態和排列。

6、去除油鏡上的香柏油：先用干凈的擦鏡紙擦2-3?次，再換另一張擦鏡紙蘸取少許二甲苯以除去殘留的香柏油，最后用擦鏡紙擦干。擦鏡頭時應順著鏡頭直徑方向擦，不要沿著圓周方向擦

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