1.抗菌藥物貯存液制備 抗菌藥物貯存液濃度不應低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高測定濃度。溶解度低的抗菌藥物可稍低于上述濃度。抗菌藥物直接購自廠商或相關機構。所需抗菌藥物溶液量或粉劑量可公式進行計算。例如:需配制100 ml濃度為1280μg/ml的抗生素貯存液,所用抗生素為粉劑,其藥物的有效力為750μg/mg。用分析天平精確稱取抗生素粉劑的量為182.6 mg。根據公式計算所需稀釋劑用量為:(182.6 mg×750μg/ml)/1280μg/ml=107.0ml,然后將182.6 mg抗生素粉劑溶解于107.0ml稀釋劑中。制備抗菌藥物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見表5。配制好的抗菌藥物貯存液應貯存于
2.藥敏試驗用抗菌藥物濃度范圍 根據NCCLS抗菌藥物敏感性試驗操作標準,藥物濃度范圍應包含耐藥、中介和敏感分界點值,特殊情況例外。
3. 培養基 NCCLS推薦使用Mueller-Hinton(MH)肉湯,pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厭氧菌在此培養基中生長良好。在測試葡萄球菌對苯唑西林的敏感性時,應在肉湯中加入2%(W/V)氯化鈉,按制造廠家的要求配制需要量的MH肉湯。嗜血桿菌屬菌使用HTM肉湯,肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含2%~5%溶解馬血的MH肉湯。
4.接種物的制備 有2種方法配制接種物,一是細菌生長方法,用接種環挑取形態相似待檢菌落3-5個,接種于4-5ml的水解酪蛋白(MH)肉湯中,
5.稀釋抗菌藥物的制備及菌液接種 取無菌試管(13×
6.孵育 將接種好的稀釋管塞好塞子,置
7.結果判斷與解釋 在讀取和報告所測試菌株的MIC前,應檢查生長對照管的細菌生長情況是否良好,同時還應檢查接種物的傳代培養情況以確定其是否污染,質控菌株的MIC值是否處于質控范圍。以肉眼觀察,藥物最低濃度管無細菌生長者,即為受試菌的MIC。甲氧芐胺嘧啶或磺胺藥物的肉湯稀釋法終點判斷,與陽性生長對照管比較抑制80%細菌生長管藥物濃度為受試菌MIC。
根據NCCLS推薦的分界點值標準,判斷耐藥(resistant, R)、敏感(susceptible, S)或中介(intermediate, I)。S表示被測菌株所引起的感染可以用該抗菌藥物的常用劑量治療有效,禁忌癥除外。R指該菌不能被抗菌藥物的常用劑量在組織液內或血液中所達到的濃度所抑制,或屬于具有特定耐藥機理(如β-內酰胺酶),所以臨床治療效果不佳。I是指MIC接近藥物的血液或組織液濃度,療效低于敏感菌。還表示被測菌株可以通過提高劑量(如β-內酰胺類藥物)被抑制,或在藥物生理性濃集的部位(如尿液)被抑制。另外,中介還作為“緩沖域”,以防止由微小的技術因素失控,所導致較大的錯誤解釋。
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