(十二)幾丁質分解菌的分離
幾丁質也稱殼多糖或稱甲殼素,廣泛地分布于海沙、海泥、海水、淡水和土壤,以及吃幾丁質的頭足類動物的胃腸,蝦、蟹體表中.如幾丁色色桿菌、嗜幾丁桿菌、呈色幾丁桿菌和蝕幾丁芽孢桿菌等。它們將幾丁質分解成中間產物醋酸與還原糖,最終產物為二氧化碳與氨.
1 .幾丁質培養基制備
(1)幾丁質的制取:洗凈蟹殼或將大海蝦殼浸泡在l%HCl 中7 天,( 2 天換鹽酸溶液1 次)脫去殼的鈣質,使殼變得柔軟而有韌性。然后用水洗凈外殼,剪成1×
用2 %氫氧化鉀溶液浸泡殼條10 天,每2 天加熱一次,加熱的溫度低于沸點為宜,借以除去幾丁質以外的其他物質,如色素和蛋白質等。
用蒸餾水洗凈殼條上的堿,然后用乙醇抽提數次.直到全部顏色脫凈為止。
這樣的幾丁質適用于液體培養基培養未純化的細菌,和保存幾丁質分解菌.
如用于瓊脂培養基中的幾丁質,必須將這種去凈雜質的幾丁質研細分散于培養基中.這可用去雜質的若干幾丁質條放于
按1:10,使幾丁質重新懸浮于水中。取5 毫升懸液于直徑
將懸液分裝于試管中,每管10 毫升,于
(2)幾丁質無機鹽培養基制備:
K2HPO
MgSO4·7H2O
NaCl 海水菌用
CaCl2·2H2O
FePO4·2H2O
NH4Cl
H2O 1000毫升
溶解上列無機鹽類,調pH 為7.0分裝于試管中,每管10毫升,各管加l 條去雜質的幾丁質條,于
(3)無機鹽瓊脂培養基:將上述培養基的無機鹽成分全部溶于水后,加入2%的瓊脂(不加幾丁質)加熱溶解之,調pH 為7.0 ,分裝于試管中,分與每管5 毫升和10 毫升的兩種,在
(4)幾丁質瓊脂平板培養基:融化10 和5 毫升的無機鹽瓊脂培養基各若干管(視實驗要求),于水浴中冷至
在5 毫升培養基管中加入0.5 毫升溫熱的幾丁質懸液,充分混和,倒入上面平皿中的無機鹽瓊脂平板上層。
這種作法能縮短幾丁質分解菌作用子幾丁質的時間。
2 .幾丁質分解菌富集培養
取樣品接種于含有幾丁質條的上述無機鹽培養基中,在適溫下培養至幾丁質產生明顯的分解后,移種到裝有同樣培養基的試管內,再培養待用。
3 ,分離和純化培養
當分解幾丁質變快時,將無機鹽增菌培養液涂抹或劃線于幾丁質瓊脂平板上,于適溫下培養,待長出菌落后,可挑其菌苔,按一般方法純化,保存于液體培養基中.當幾丁質條接近消失時再移種。
4 .供參考的培養基
(1)幾丁質瓊脂培養基:
K2HPO
KH2PO4
MgSO4·7H2O
FeSO4·7H2O
ZnSO4
瓊脂
蒸餾水
Ph7.0
以上為基礎培養基,以
(2)膠體幾丁質的制備:取凈幾丁質