（十）石油微生物種群的分離

隨著對各海域石油的開采利用，石油對海區污染將不可避免地影響生態平衡及漁獲量。為解決這個間題，可利用能降解石油的微生物．這首先要對此類微生物分離篩選。選出降解石油能力強的菌株進行培養利用．

1 ．培養基配制

（1）港灣鹽培養基配制：

NaCl 10 克

MgCl₂·6H₂O   2.3 克

KCl    0.3 克

加蒸餾水至1 升

（2）基礎培養基配方：

葡萄糖2.0 克

酵母汁1.0克

酪蛋白氨基酸（酪蛋白水解物）   5.0克

純瓊脂20克

加海水1000 毫升

在高壓滅菌前調整供細菌用的pH7.0 ，供霉菌和酵母菌用的要調至5.5 ，高壓滅菌各培養基，冷至44 ℃ 后，供細菌用的，每升加10 毫克的抑真菌劑；供真菌和酵母菌用的，每升加鏈霉素和四環素各50 毫克，搖勻后，制成平板培養基。

（3）油鹽培養基（雙倍濃度）:

KNO₃   2.0 克

MgSO₄    1.0克

汽油（無去垢的）10.0毫升

蒸餾水1000毫升

① 硅酸鉀配制。在100 毫升的7%KOH 溶液內加熱溶解吸。10克的硅酸膠。

② 加酚紅指示劑（1.003%）于雙倍濃度油鹽培養基中。

③ 分別取① 和② 各50毫升于121 ℃ 蒸汽下滅菌巧分鐘．

④ 當油鹽培養基冷至室溫時，加0.5 毫升的KH2PO4和1 毫升的20%磷酸．

⑤ 將50 毫升的硅酸鉀溶液（pH6-7 桔紅色）傾至50毫升的油鹽培養基中，迅速混勻．而后各倒20 毫升于每個培養皿中，制成平板培養基．

⑥ 劃線前平板培養基應是干燥的，小的培養皿可作為微孔過濾樣品的微生物數量計算。

2 ．分離步驟

（1）用采樣器分別從石油污染海區和相對無污染海區取水樣和底泥樣品。

（2）分別移l 毫升水樣和1 克底泥樣，各放于稀釋試管內，按10 倍稀釋法，稀釋至10^-4

（3）搖勻稀釋液后，各用無菌移液管吸取適量的原水樣及各稀釋度水樣和泥樣注入每一類型的平板培養基上，各作雙份。

（4）用無菌玻瑞曲棒涂勻平板培養基上的接種樣，

（5）接種后的培養皿于20℃ 溫箱中顛倒培養．

（6）異養型細菌可培養7 天，觀察計算其菌落，利用石油的微生物．培養14天而后觀察記數．

（7）從培養的細菌中，取出不同類型的菌落，在單濃度油鹽培養基上，加上汽油5%做生長實驗。

3 ．將實驗記錄填于表2-6

表2-6 石油微生物種群分離實驗記錄表

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