不同類型微生物分離方法

（一）厭氣細菌的分離和無氧裝置

在水層及沉積物中都有厭氣細菌生長著。要將它們分離培養需要創造缺氧環境，其方法很多，通常可分為物理、化學和生物三類方法。物理方法是將接種物置于抽氣（或加充非氧氣）密閉箱中，使其在缺氧下培養長出。化學吸氧法是用化學藥品把培養器中的氧氣吸去．造成缺氧的培養環境。生物吸氧法是利用燕麥萌發時的旺盛呼吸作用，吸收培養環境中的氧氣，形成缺氧的環境條件．

1.焦性沒食子酸吸氧法

利用焦性沒食子酸在堿性溶液中吸收游離氧氣，造成決氧的培養環境．此法較適用于小型的科學實驗。每克沒食子酸（淡綠色）在過量堿性溶液中能吸收100毫升空氣中的氧．生成深棕色的焦性沒食橙。

試驗步驟

① 把樣品稀釋液接種于加1%葡萄糖、0.1%硫化甘醇酸鈉和0.0002%美藍的2216E 培養基中，這種培養基滅菌后應避免與大氣接觸。如果所接種的是淡水樣品，可用葡萄糖肉膏蛋白胨培養基替代2216E 培養基。

② 吸20%氫氧化鈉溶液2.5 毫升于小玻璃皿或試劑瓶的塑料蓋中，將此皿放于玻璃板或搪瓷盤上。

③ 加焦性沒食子酸0.5 克。

④ 立即將預先接種好的培養皿倒扣于小玻璃皿上。

⑤ 用溶化的石臘將培養皿與玻璃板之間的縫隙封固，置于適當溫度下培養至長出明顯的菌落后進行觀察。

注意事項：

① 可將吸氧劑改用等量的焦性沒食子酸與無水碳酸鈉混合物（l -2 克），不必加水，這樣有利于吸水，便于形成單顆菌落。

② 必須選用適當高度的培養皿和盛吸氧劑小皿（或試劑瓶蓋）以防吸氧劑同培養基接觸．

2 ．圓形玻璃板隔絕空氣培養法

當平板培養基接種后．立即用比平皿稍小的無菌圓形玻璃板蓋上，以避免培養基同空氣接觸。而后送入培養箱培養。在長出菌落后．除玻璃圓板周圍外 , 美藍的顏色會很快恢復，即處于還原狀態．沒有同氧起氧化作用，這說明培養基上的細菌處于缺氧狀態，長出的菌落為厭氧細菌菌落。

3 ．機械抽氣法

把已接種的平板培養物立即放入干燥器中，用真空泵抽出空氣，而后通入CO₂ 以維持干燥器內外壓力平衡，以利于細菌生長。在一定溫度下培養至長出明顯菌落，觀察其形態。

4 ，生物吸氧法

將培養有發芽旺盛的燕麥小平皿放在玻璃板上，把已接種的大培養皿倒蓋在上面，以石蠟密封大平皿與玻璃板間的縫隙，置一定溫度下培養至長出明顯的菌落 . 將其中的小玻璃皿換成培養有發芽旺盛燕麥芽的小平皿）。

5 ．注意事項

厭氧菌的培養必須符合以下三個條件：

（1）當氧氣與培養基接觸期間和在培養基制備中不能產生有毒的氧化作用產物。

（2）保溫和培養期間．需保持培養基排除空氣的條件．

（3）在培養裝置中可維持低氧化還原作用。

并非所有方法都能符合這些條件，但必須盡量符合。采用對實驗有利和方便的方法。

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