無菌操作

（一）船上微生物實驗室、無菌室及其器具

海洋、港灣和江河中的微生物調查研究，需要專用的調查船，要求船上有專用的實驗室。由于水樣的處理、現場記錄的整理等等需要在室內進行，因而要有適當大小的實驗室。室內要有交流電源、供水系統和必要設備。如冰箱、恒溫培養箱、真空抽氣泵、電爐、小型的無菌箱和高壓蒸汽鍋．以及器具〔見下節的（一）〕 ．

無菌室是供上岸時實驗用的。室內要求整潔，有過濾空氣裝置，應無灰塵和基本無菌，室內應有二道門，門上應掛布簾，預防人進入時空氣直接通入室內。如果室內無過濾空氣的裝置，室內應安裝紫外燈殺滅空氣中的微生物（或用化學藥物），室內同樣要有交流電源和必要的器具和設備，

 

（二）基本操作技術

微生物的每一個實驗研究工作都必須應用無菌操作技術。主要是采用焚燒滅菌——干熱滅菌原理，及應用已滅菌的器具、藥物、培養基，使在微生物的接種、分離、沖稀等工作中不致染雜菌，有助于實驗目的的實現．

 

1 ．斜面接種法

（1）取無菌斜面培養基試管貼上標簽，編號，注明接種菌的菌名，接種日期，接種人的姓名等。

（2）點燃酒精燈或煤氣燈，以下的操作．尤其是試管的菌種都要始終在火焰邊進行．

（3）將菌種和斜面培養基的兩支試管放在左手拇指和其他四指上．使中指在兩試管之間．斜面向上，管口向外，成水平狀態，也可將兩試管放在左手掌中央，用手指托住試管

（4）用右手將棉花塞擰松，以利接種時拔出。

（5）用右手拿接種環柄，使接種環垂直在火焰上．將環的部分燒紅滅菌，環以上部分，在接種時進入試管的一段也應在火焰上燒過滅菌．

（6）用右手的小指、無名指和手掌拔取棉塞，切勿將棉塞放在桌上，應始終夾在手中。

（7）灼燒試管口，并靠手腕動作不斷地轉動試管口，借以燒死粘染的微生物。

（8）將燒過的接種環伸入菌種管內，接觸一下沒長菌的培養基部分，使其冷卻，以免燙死接種菌體。而后輕輕地挑取菌苔少許，慢慢地將接種環抽出試管，注意不要使環的部分碰管壁。取出后不可使環通過火悄了以免把苗燒死或引起變種．

（9）隨即將接種環伸進手中的另一試管，在培養基上輕輕地劃直線或波線接種。劃線時要從底部到頂部，即由下而上，不要把培養基劃破，也不要使菌種沾污管壁。

（10）再灼燒管口后，塞上棉塞．塞棉塞時不要甩試管去迎棉塞，以免移動試管時納入不清潔的空氣而染菌。

（11）將接種環再灼燒，殺死環上的殘菌，以免污染。尤其是對病原菌，此項操作更為重要，反之就有致病的危險。最后用右手塞緊棉塞。

 

2 ．液體培養基的接種用滴管或移液管接種時，應事先滅菌好，不能將滴管或移液管在火焰上灼燒，只能使滴管或移液管在火焰上通過1-2 次，接觸菌液部分，在通過火焰時應緩慢些，使沾染管表面上的微生物殺死．但不能太慢，以免受熱膨脹而改變容量。接種量為0.1毫升．其他步驟參照斜面無菌接種法。

 

3 ．穿刻接種

接種前后對接種針及試管口的處理同斜面接種法，接種時將挑有接種物的接種針，從半固體培養基中央直刺至離管底一厘米左右．成一直線后立即從原刺線退出。刺入或退出時，均不可使接種針左右搖動 .