（二）配制培養基的一般過程及注意事項

配制養基是進行微生物實驗的最基本的操作技術之一。它是根據已經設計出來的化學配方和工作需要．用不同方法配制各類型培養基。共同操作過程有：準備器材、藥品，稱、量、溶解藥物，調節pH ，過濾、分裝和滅菌等步驟。

1 ．一般過程

( 1 ）溶液配制：先在溶器（燒杯、瓷杯或椎形瓶）內倒入一部分水．按培養基配方稱取各種化學藥品，依次加入水中，攪拌溶解之，然后補足所需水量。如有難溶解物質，需要加熱助溶．加熱過程中所蒸發的水量應給予補足。配制固體培養基時，加入瓊脂后．在加熱中必須不斷地攪拌，直至全部溶解為止，以免瓊脂粘底燒焦．

( 2 ）用pH 試紙沾一點溶解液比色(或用pH電位計、酸度計、氫離子濃度比色計等）測定溶液的pH ，以10%HCl 或10%（或0.1N ) NaOH 調節至所需的pH 值。

( 3 ）用濾紙：紗布或棉花等將已調好pH 的培養基趁熱過濾。

（4）在過濾中，按需要將培養基分裝入錐形瓶或試管，裝量各為它們容量的l/4-1/3 ,( 15×150 毫米試管約裝5-8毫升，20 × 200 毫米試管約裝12-15 毫升）.

分裝方法，以左手持試管（2-3 支）中部。或用左手食指和拇指夾住錐形瓶．用右手食指及拇指控制彈簧夾，中指和無名指夾玻璃管嘴．使培養基直流試管（或錐形瓶）內。

一種簡易分裝法分裝器 ，以腳踩活動夾板使培養基進入試管或燒瓶中。用一小塊橡皮塞穿著在璃管，與試管相通的一端作一擋板，擋板上下移動可調節分裝培養基數量，當擋板向上移動時．管口距試管底短，裝置少．反之則多。若所壓入的培養基超過管出口時，放松吸氣球，浸過后的部分培養基便被吸回．故能以管距試管底高度作為裝培養基高度準線．

分裝時連續操作，可使不溶物在吸濾瓶中翻滾均勻。分裝瓊脂培養基時，應將吸濾瓶置于50 ℃ 水溶中，以免凝固。

在分裝過程中不能使培養基粘附瓶口或試管口，以免粘污棉塞，導致雜菌污染。定量分裝時試管的規格要一致。分裝后塞上棉塞，滅菌后備用。

2 ．注意事項

（ 1 ）培養基成分的混合：在混合培養基成分時．一般是按配方的順序把各成分先溶解于少于總量的水中。象肉膏一類的成分，不是粉狀的．可盛在小燒杯中或小表而皿中稱量，而后用水沖洗入。蛋白胨和酵母膏等粉狀物，容易吸水分而受潮，稱取時動作要迅速。磷酸鹽和鎂鹽在混合時產生沉淀物。由于在培養基中加入了足夠量的無機鹽，故在培養過程中并不因此而產生問題，但在特殊的情況下需要避免沉淀時，則應將發生反應的成分分別滅菌后再混合．如維生素、氨基酸、無機鹽等微量成分，可先配成高濃度的溶液．而后再稀釋，加入合適的量，則更方便些。

（2）對水的要求：如果是培養海洋微生物。一般要求用與樣品同站或同鹽度的陳海水，或用同鹽度的人工海水，培養淡水微生物時可用自來水、蒸餾水或無離子水，但有時則需用經嚴格蒸餾的蒸餾水。所以用于溶解培養基各成分的水，須因培養的菌種和培養要求而異。

（3 ）有些培養基的成分必須分別滅菌而后與其他已滅菌的成分混合。原因是：如葡萄糖和其他成分一起加熱時．有時會變褐和分解；尿素加熱時會發生分解；牛奶和瓊脂一起加壓滅菌時，二者不能均勻混合：醇類加熱時易揮發，正構液體石蠟加熱時易變構等等。此外．用碳酸鈣作為培養乳酸菌和醋酸菌培養基的成分時．應另行干熱滅菌。

（ 4 ）如果配制低pH 的瓊脂培養基時，應在pH 為中性時滅菌．而后用滅過菌的低濃度鹽酸或氫氧化鈉調pH 。否則，直接在低pH值下滅菌，會使瓊脂水解，冷卻后不凝固。

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