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實驗室技術——對可能含有朊蛋白物質的防護



錄入時間:2008-9-10 10:57:36 來源:青島龙8娱乐官方网站

   朊蛋白(prion,也稱作為“慢病毒”)與許多疾病相關,包括某些傳染性海綿狀腦病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)、克雅病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD;包括新的變異型)、格-施-沙綜合征(Gerstmann-Sträussler-Scheinker syndrome)、人類致死性家族性失眠癥和庫魯病、綿羊和山羊的瘙癢病、家畜的牛海綿狀腦病(bovine spongiform encephalopathy,BSE),以及鹿、糜鹿及貂的傳染性腦病。盡管克雅病已經傳播到了人類,但是還沒有證據證實發生過由這些病原體所引起的實驗室感染。不過,在操作已感染或潛在感染的人或動物材料時,還是應當謹慎注意防護。
  當進行與傳染性海綿狀腦病有關材料的工作時,應根據微生物因子和所研究標本的特征來選擇生物安全水平,并向國內權威機構咨詢后進行。在中樞神經系統組織中發現有最高濃度的朊蛋白,動物研究還表明在脾臟、胸腺、淋巴結和肺內可能也有高濃度的朊蛋白。最近的研究表明,舌和骨骼肌組織也存在潛在朊蛋白感染的危險[21-24]。
  由于很難徹底滅活朊蛋白,因此盡可能地使用一次性器具,在生物安全柜的工作臺面使用一次性防護罩,這些措施都非常重要。
  主要應該預防的是避免污染材料的食入或實驗室工作人員的皮膚刺傷。由于朊蛋白不能被普通的實驗室消毒和滅菌方法所滅活,故應當遵循以下防護措施:
  1、強烈建議使用專用儀器設備,亦即不與其他實驗室共用儀器。
  2、必須穿戴一次性防護服(隔離衣和圍裙)和手套(對病理學家而言,要在兩層橡膠手套間戴鋼絲網手套)。
  3、強烈建議使用一次性塑料制品,它們可按干廢棄物處理并丟棄。
  4、由于滅菌的問題不能使用組織處理機(tissue processors),應當使用廣口瓶或燒杯(塑料材質)替代。
  5、所有操作必須在生物安全柜中進行。
  6、必須特別小心以避免產生氣溶膠、意外食入、劃傷或刺傷皮膚。
  7、福爾馬林固定的組織,即使在長時間福爾馬林的浸泡后,仍應視作具有感染性。
  8、含有朊蛋白的組織標本暴露于96%甲酸1 h可以基本失活[24, 25]。
  9、實驗臺垃圾,包括一次性手套、隔離衣和圍裙,均應當采用多孔負荷蒸汽滅菌器在134~137℃高壓滅菌18 min一個循環,或高壓滅菌3 min六個循環,然后再焚燒。
  10、鋼絲網手套或Kevlar手套等非一次性用具,均必須收集起來清除污染。
  11、污染有朊蛋白的感染性廢液應當用含20g/L(2%)有效氯的次氯酸鈉(終濃度)處理1 h。
  12、多聚甲醛熏蒸的方法不能降低朊蛋白的滴度,朊蛋白對紫外線照射也具有抵抗力。但是,安全柜仍必須用標準方法來清除污染(如甲醛蒸氣),以滅活可能存在的其他微生物因子。
  13、朊蛋白污染的生物安全柜和其他表面可以采用含20g/L(2%)有效氯的次氯酸鈉處理1 h來清除污染。
  14、HEPA過濾器摘除后需要在至少1000℃的溫度下焚燒。在焚燒之前推薦進行下述處理:
a. 在摘除前用噴漆噴頭給過濾器的裸露表面噴霧,
b. 在摘除過程中將過濾器“裝袋”,以及
c. 從工作柜中除去HEPA過濾器,這樣可以不污染難以操作的安全柜壓力排風系統。
  15、用具應當用含20g/L(2%)有效氯的次氯酸鈉浸泡1 h,然后用水徹底清洗再進行高壓滅菌。
  16、不能高壓滅菌的用具可以反復用含20g/L(2%)有效氯的次氯酸鈉潤濕超過1h來進行清潔,并要求用水沖洗以清除殘留的次氯酸鈉。

 

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