附    錄C

沙土管保藏法

 

C.1   適用范圍

本方法適用于產孢類放線菌、芽孢桿菌、曲霉屬、青霉屬以及少數酵母如隱球酵母和紅酵母等。不適用于病原性真菌的保藏，特別是不適于以菌絲發育為主的真菌的保藏。

C.2   原理

干燥條件下微生物菌種代謝活動減緩，繁殖速度受到抑制。此方法可減少菌株突變，延長存活時間。

C.3   方法與步驟

C.3.1   沙土管制備

將河沙用60目過篩，棄去大顆粒及雜質，再用80目過篩，去掉細沙。用吸鐵石吸去鐵質，放入容器中用10%鹽酸浸泡，如河沙中有機物較多可用20%鹽酸浸泡。24小時后倒去鹽酸，用水洗泡數次至中性，將沙子烘干或曬干。另取瘦紅土100目過篩,水洗至中性，烘干，按沙∶土=  2∶1混合。把混勻的沙土分裝入安瓿管或小試管中，高度為1厘米左右。塞好棉塞，0.1MPa滅菌30分鐘，或常壓間歇滅菌3次，每天每次1小時。滅菌后在不同部位抽出若干管，分別加營養肉汁、麥芽汁、豆芽汁等培養基，經培養檢查后無微生物生長方可使用。

C.3.2   斜面培養物的制備

參照附錄A。

C.3.3   制備菌懸液

向培養好的斜面培養物中注入3mL-5mL無菌水，洗下細胞或孢子制成菌懸液。用無菌吸管吸取菌懸液，均勻滴入沙土管中，每管0.2mL -0.5mL。放線菌和霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。

C.3.4   干燥

用真空泵抽去安瓿管中水分并放置于干燥器內。

C.3.5   純培養檢查

從做好的沙土管中，按10∶1比例抽查。無菌條件下用接種環取出少量沙土粒，接種于適宜的固體培養基上，培養后觀察其生長情況和有無雜菌生長。如出現雜菌或菌落數很少，或根本不長，則須進一步抽樣檢查。

C.3.6   保藏

將純培養檢查合格的沙土管用火焰熔封管口。制好的沙土管存放于低溫(4℃-15℃)干燥處，半年檢查一次活力及雜菌情況。也可將純培養檢查合格的沙土管直接用牛皮紙或塑料紙包好，置干燥器內保存。用此方法保藏時間為2-10年不等。

C.3.7   復活