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顯微鏡的使用及微生物顯微特征的觀察



錄入時間:2010-8-6 15:07:00 來源:易生物

一、目的要求
1、了解顯微鏡的構造,掌握顯微鏡的使用方法;2、了解細菌的光學顯微特征。
二、基本構造
普通光學顯微鏡構造主要分為三部分:機械部分照明部分光學部分。

1.機械部分
(1)鏡座:是顯微鏡的底座,用以支持整個鏡體。
(2)鏡柱:是鏡座上面直立的部分,用以連接鏡座和鏡臂。
(3)鏡臂:一端連于鏡柱,一端連于鏡筒。
(4)鏡筒:連在鏡臂的前上方,鏡筒上端裝有目鏡,下端裝有物鏡轉換器。
(5)物鏡轉換器:接于棱鏡殼的下方,可自由轉動,盤上有3-4個圓孔,是安裝物鏡部位,轉動轉換器,可以調換不同倍數的物鏡。
(6)載物臺:在鏡筒下方,形狀有方、圓兩種,用以放置玻片標本,中央有一通光孔,龙8娱乐官方网站所用的顯微鏡其鏡臺上裝有玻片標本推進器,推進器左側有彈簧夾,用以夾持玻片標本,鏡臺下有推進器調節輪,可使玻片標本作左右、前后方向的移動。
(7)焦距調節輪:是裝在鏡柱上的大小兩種螺旋,可使鏡臺作上下方向的移動以調節觀察焦距。
2.照明部分
裝在鏡臺下方,包括反光鏡,集光器。
(1)反光鏡:裝在鏡座上面,可向任意方向轉動,它有平、凹兩面,其作用是將光源光線反射到聚光器上,再經通光孔照明標本,凹面鏡聚光作用強,適于光線較弱的時候使用,平面鏡聚光作用弱,適于光線較強時使用。
(2)集光器位于鏡臺下方的集光器架上,由聚光鏡和光圈組成,其作用是把光線集中到所要觀察的標本上。
①聚光鏡:由一片或數片透鏡組成,起匯聚光線的作用,加強對標本的照明,并使光線射入物鏡內,鏡柱旁有一調節螺旋,轉動它可升降聚光器,以調節視野中光亮度的強弱。
②光圈:在聚光鏡下方,由十幾張金屬薄片組成,其外側伸出一柄,推動它可調節其開孔的大小,以調節光量。
3.光學部分
(1)目鏡:裝在鏡筒的上端,通常備有2-3個,上面刻有5×、10×或15×符號以表示其放大倍數,一般裝的是10×的目鏡。
(2)物鏡:裝在鏡筒下端的旋轉器上,一般有3-4個物鏡,其中最短的刻有“10×”符號的為低倍鏡,較長的刻有“40×”符號的為高倍鏡,最長的刻有 “100×”符號的為油鏡,此外,在不同的鏡頭上加有一圈不同顏色的線,以區別不同的鏡頭。
在物鏡上,還有鏡口率(N.A.)的標志,它反應該鏡頭分辨力的大小,其數字越大,表示分辨率越高,各物鏡的鏡口率如下表:
物鏡 鏡口率(N.A.) 工作距離(mm)
10× 0.25 5.40
40× 0.65 0.39
100× 1.30 0.11
表中的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(物象調節清楚)時物鏡的下表面與蓋玻片(蓋玻片的厚度一般為0.17mm)上表面之間的距離,物鏡的放大倍數愈大,它的工作距離愈小。
顯微鏡的放大倍數是物鏡的放大倍數與目鏡的放大倍數的乘積,如物鏡為10×,目鏡為10×,其放大倍數就為10×10=100
三、實驗器材
枯草芽孢桿菌及大腸桿菌固定片、二甲苯、香柏油、擦鏡紙、顯微鏡
四、方法與步驟
1.低倍鏡的使用方法
(1)取鏡和放置:顯微鏡平時存放在柜或箱中,用時從柜中取出,右手緊握鏡臂,左一手托住鏡座,將顯微鏡放在自己左肩前方的實驗臺上,鏡座后端距桌邊 1-2寸為宜,便于坐著操作。
(2)對光:用拇指和中指移動旋轉器,使低倍鏡對準鏡臺的通光孔。打開光圈,上升集光器,并將反光鏡轉向光源,以左眼在目鏡上觀察(右眼睜開),同時調節反光鏡方向,直到視野內的光線均勻明亮為止,有內置光源的只需通過調節位于鏡座上的光調節紐以調節進光強度。
(3)放置玻片標本:取一玻片標本放在鏡臺上,一定使有蓋玻片的一面朝上,切不可放反,用推片器彈簧夾夾住,然后旋轉推片器螺旋,將所要觀察的部位調到通光孔的正中
(4)調節焦距:以左手按逆時針方向轉動粗調節器,使鏡臺緩慢地上升至物鏡距標本片約5毫米處,應注意在上升鏡臺時,切勿在目鏡上觀察。一定要從右側看著鏡臺上升,以免上升過多,造成鏡頭或標本片的損壞。然后,兩眼同時睜開,用左眼在目鏡上觀察,左手順時針方向緩慢轉動粗調節器,使鏡臺緩慢下降,直到視野中出現清晰的物象為止。
如果物象不在視野中心,可調節推片器將其調到中心(注意移動玻片的方向與視野物象移動的方向是相反的)。如果視野內的亮度不合適,可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調節,如果在調節焦距時,鏡臺下降已超過工作距離(>5.40mm)而未見到物象,說明此次操作失敗,則應重新操作,切不可心急而盲目地上升鏡臺。
2.高倍鏡的使用方法
(1)選好目標:一定要先在低倍鏡下把需進一步觀察的部位調到中心,同時把物象調節到最清晰的程度,才能進行高倍鏡的觀察。
(2)轉動轉換器,調換上高倍鏡頭,轉換高倍鏡時轉動速度要慢,并從側面進行觀察(防止高倍鏡頭碰撞玻片),如高倍鏡頭碰到玻片,說明低倍鏡的焦距沒有調好,應重新操作。
(3)調節焦距:轉換好高倍鏡后,用左眼在目鏡上觀察,此時一般能見到一個不太清楚的物象,可將細調節器的螺旋逆時針移動約0.5-1圈,即可獲得清晰的物象(切勿用粗調節器!)
如果視野的亮度不合適,可用集光器和光圈加以調節,如果需要更換玻片標本時,必須順時針(切勿轉錯方向)轉動粗調節器使鏡臺下降,方可取下玻片標本。
3. 油鏡的使用方法
(1)先用粗調節旋鈕將鏡筒提升(或將載物臺下降)約2cm,并將高倍鏡轉出;
(2)在玻片標本的鏡檢部位滴上一滴香柏油;
(3)從側面注視,用粗調節旋鈕將載物臺緩緩地上升,(或鏡筒下降),使油浸物鏡浸入香柏油中,使鏡頭幾乎與標本接觸;
(4)從接目鏡內觀察,放大視場光闌及聚光鏡上的虹彩光圈(帶視場光闌油鏡開大視場光闌),上調聚光器,使光線充分照明。用粗調節旋鈕將載物臺徐徐下降(或鏡筒上升),當出現物像一閃后改用細調節旋鈕調至最清晰為止。如油鏡已離開油面而仍未見到物象,必須再從側面觀察,重復上述操作;
(5)觀察完畢,下降載物臺,將油鏡頭轉出,先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油,再用擦鏡紙蘸少許乙醚酒精混合液(乙醚2份,純酒精3份)或二甲苯,擦去鏡頭上殘留油跡,最后再用擦鏡紙擦拭2—3下即可,(注意向一個方向擦拭);
(6)將各部分還原,轉動物鏡轉換器,使物鏡頭不與載物臺通光孔相對,而是成八字形位置,再將鏡筒下降至最低,降下聚光器,反光鏡與聚光器垂直,用一個干凈手帕將接目鏡罩好,以免目鏡頭沾污灰塵。最后用柔軟紗布清潔載物臺等機械部分,然后將顯微鏡放回柜內或鏡箱中。
五、注意事項
1.持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢,不可單手提取,以免零件脫落或碰撞到其它地方。
2.輕拿輕放,不可把顯微鏡放置在實驗臺的邊緣,以免碰翻落地。
3.保持顯微鏡的清潔,光學和照明部分只能用擦鏡紙擦拭,切忌口吹手抹或用布擦,機械部分用布擦拭。
4.水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺,如果沾污應立即擦凈。
5.放置玻片標本時要對準通光孔中央,且不能反放玻片,防止壓壞玻片或碰壞物鏡。
6.要養成兩眼同時睜開的習慣,以左眼觀察視野,右眼用以繪圖。
7.不要隨意取下目鏡,以防止塵土落入物鏡,也不要任意拆卸各種零件,以防損壞。
??8.使用完畢后,必須復原才能放回鏡箱內,其步驟是:取下標本片,轉動旋轉器使鏡頭離開通光孔,下降鏡臺,平放反光鏡,下降集光器(但不要接觸反光鏡)、關閉光圈,推片器回位,蓋上綢布和外罩,放回實驗臺柜內。最后填寫使用登記表。

 

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