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微生物培養基質控與圖解——培養基氫離子濃度的測定

錄入時間:2010-8-6 14:42:11 來源：青島龙8娱乐官方网站

第二節培養基氫離子濃度的測定

測定培養基pH的方法很多。常用比色法和pH計法。比色法是利用指示劑在不同pH溶液的顏色變化，與標準比色管（或比色板）相比，得出pH值。它的優點是不受溶液溫度的影響，高壓后或加熱的培養基不必冷卻后即可測定，使用方便。精密pH試紙也可測定，方法簡便，但數值不夠準確。下面介紹標準單管比色液的配制。

配成各種酸堿度的緩沖液，再加入一定量的指示劑（如酚紅或溴麝香草酚蘭）即成。

兩種磷酸鹽試劑KH₂ P0₄和Na₂ HP0₄置于105℃干烤3小時。Na₂ HP0₄不易溶解，預先要在乳缽中研細，使用的蒸餾水需高壓滅菌或者煮開。配制溶液要使用滴定管和容量瓶。

1．指示劑的配制

(1)酚紅( PR)指示劑的配制：精確稱取PR0.02克，置于玻璃乳缽中隨研隨加0.01mol/L氫氧化鈉溶液5.46ml，加水至100ml。

(2)溴麝香草酚蘭(BTB)指示劑的配制：精確稱取BTB0.4克，置于玻璃乳缽中隨研隨加0.05molNaOH溶液12.8ml，10倍稀釋即可。

2．標準比色管的配制

(1)先配制兩種磷酸鹽溶液：

1液：1/15mol/L的Na₂HP0₄溶液：稱取Na₂ HP0₄9.47殼，加蒸餾水至1000ml，溶解混勻。

2液：l/15mol/L的KH₂P0₄溶液：稱取KH₂ P0₄9.07克，加蒸餾水至1000ml，溶解混勻。

(2)按表中所列配制pH標準管

表1 PR pH標準比色管配制

緩沖液 6.8 7. 0 7. 2 7.4 7.6 7. 8 8.0 8.2 8.4

1液 (ml) 19. 84 24. 44 28. 80 32. 32 34. 80 36. 60 37. 88 38. 80 39. 20

2液 {ml) 20.16 15.56 11.20 7.68 5.20 3.40 2.12 1.20 0.80

l液與2液混合為40ml，分別加入0.02% PR指示劑2ml混勻。分裝試管，每管l0ml，封口，121℃高壓滅菌20分鐘，貼簽、裝盒。

表2 BTBpH標準比色管配制

緩沖液	6.0	3.2	6.4	6.6	6.8	7.0	7.2	7.4	7.6
1液（ml）	12	18	26	37	50	62	73	82	88
2液（ml）	88	82	74	63	50	38	27	18	12

1液與2液混合為100 ml，分別加入0.04%BTB指示剎5ml混勻．，分裝試管．每管10ml，封口。121℃高壓滅菌20分鐘，貼簽、裝盒。

3．標準pH比色管使用說明

標準pH比色管，共有比色管9支，每管pH間隔0.2，另加蒸餾水1管，并附有比色用空管4支。

比色管的名稱濃度(%) 標準比色范圍(pH)

PR指示劑 0.02 6.8 -8.4

BTB指示劑 0.04 6.0 -7.6

酚紅( Pnenol red)指示劑的變色范圍在pH6.8- 8.4．酸性時為黃色，堿性為粉紅色，中性為淡紅色。溴麝香草酚藍( Bromothymol blue)指示劑范圍在pH6.0—7.6．酸性時為黃色，堿性為藍色，中性為黃綠色。在培養基中這兩種指示劑應用范圍最廣。

4．pH的校正

若測定管過酸或過堿可用0.1mol/L氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸溶液矯正，直至顏色與標

準管相同為止，加堿或加酸時要精確緩慢，每加l滴后要充分混勻，比色后再加滴2滴（有

時僅半滴）準確記錄加入的量。

目前國外有pH比色盤，適于培養基pH測定。使用更方便，檢測數值更準確。

表3培養基常用指示劑及變色范圍

指示劑名稱	有效pH范圍	顏色（酸）	顏色（堿）
麝香草酚藍（酸域）	1.2-1.8	紅	黃
溴酚藍	3.0-4.6	黃	藍
溴甲酚綠	3.8-5.4	黃	藍
甲基紅	4.4-6.0	紅	黃
氯酚紅	4.8-6.4	黃	紅
溴甲酚紫	5.2-6.8	黃	紫
溴酚紅	5.2-7.0	黃	紅
溴麝香草酚藍	6.0-7.6	黃	藍
中性紅	6.8-8.0	紅	黃
薔薇酸	6.8-8.2	黃	紅
酚紅	6.8-8.4	黃	紅
甲酚紅	7.2-8.8	黃	紅
麝香草酚藍（堿域）	8.0-9.6	黃	藍
酚酞	8.3-10.0	無色	紅
石蕊	4.5-8.3	紅	藍

常用指示劑的配制：

最常用的指示劑有溴麝香草酚藍(BTB)、溴甲酚紫(BP)、酚紅(PR)和酸性復紅(Andrade)。它們的配制如下。

1．溴麝香草酚藍指示劑的變色范圍為pH6.8—7.7，酸性時為黃色，堿性時為藍色，中性時為黃綠色，在培養基中應用最廣。

(1)稱取0.4g溴麝香草酚藍置研缽中，徐徐加入12.8ml的0.05mrl氫氧化鈉，邊加邊研磨，加完后再充分研磨使全部溶解。

(2)用蒸餾水稀釋至100ml，即為0.4%溴麝香草酚藍指示劑，存棕色試劑瓶內放暗處，備用。滴定培養基的pH時，再用蒸餾水稀釋至10倍，為0.04%的溶液。

2．溴甲酚紫指示劑的變色范圍為pH5.4~7.0，酸性時為黃色，堿性時為紫色。

(1)稱取0.4g溴甲酚紫置研缽中，徐徐加入13.8ml的0.05 mol氧氧化鈉，邊加邊研磨，加完后再充分研磨使全部溶解。

(2)用蒸餾水稀釋至100ml，即為0.4%溴甲酚紫指示劑，存棕色試劑瓶內放暗處，備用。也可配成1.6%的乙醇溶液。

3．酚紅指示劑的變色范圍為pH6.9—8.5，酸性時為黃色，堿性時為紅色，中性時為橘黃或橙色。

(1)稱取0.4g酚紅置研缽中，徐徐加入23.5m1的0.05mol氫氧化鈉，邊加邊研磨，加完后冉充分研磨使全部溶解。

(2)用蒸餾水稀釋至100ml，即為0.4%酚紅指示劑，存棕色試劑瓶內放暗處，備用。

滴定時用0.02%的溶液，即用蒸餾水再稀釋至20倍。

4．酸性復紅指示劑在中性和堿性時無色，酸性時為紅色，顏色反應穩定，不會有可疑的結果，故推薦為標準糖發酵管的指示劑。

稱取酸性復紅0.5g置研缽中，邊磨邊加蒸餾水約50ml使溶解，再滴加1mol氫氧化鈉，邊加邊混合，使溶液由紅色變為棕紅色，直至草黃色為止，約需1mol氫氧化鈉15~20ml，最后補足蒸餾水至100ml。滴加堿液時，應邊加邊仔細觀察，切勿1次加入過多或過快，以免過量。

表4幾種常見菌對pH的適應范圍

細菌名稱	最低	最高	最適
結核分枝桿菌	6.0	7.6	6.5-6.8
破傷風芽胞梭菌	6.0	8.3	7.0-7.5
溶組織芽胞梭菌	5.0-5.8	8.5-9.0	6.0-7.6
分枝乳桿菌	3.8-4.4	7.2	5.4-6.4
銅綠假單胞桿菌	5.6	8.0	6.6-7.0
大腸埃希菌	4.4	7.8	6.0-7.0
傷寒沙門菌	6.2	8.0	6.8-7.0
腸炎沙門菌	5.0	8.5	7.0-8.0
志賀菌	4.5	8.5	6.4-7.8
布魯氏菌	6.3	8.4	6.8-7.2
土拉熱桿菌			7.2
霍亂弧菌	6.0	9.5	7.6-8.2
表皮葡萄球菌	5.6	8.1	7.4
炭疽芽胞桿菌	6.0	8.5	7.0-7.4
鏈球菌	5.5	8.0	7.4-7.6
腦膜炎奈瑟菌	6.1	7.8-8.0	7.4 -7.6
酵母菌	2.5	8.0	4.0-5.8
白喉棒狀桿菌	6.0	8.3	7.2-7.8
產芽胞梭菌	5.0-5.8	8.5-9.0	6.0-7.6
肉毒芽胞梭菌	5.0	9.0	7.0-7.2
嗜酸乳桿菌	4.0-4.6	6.8	5.8-6.0
產氣腸桿菌	4.4	9.0	6.0-7.0
普通變形桿菌	4.4	8.4	6.0-7.0
甲型副傷寒沙門菌	4.5	8.0	6.4-7.2
乙型副傷寒沙門菌	4.5	8.0	6.4-7.2
糞產堿桿菌	6.4	9.7	8.5
鼠疫耶爾森菌	6.6	7.5	6.9-7.1
流感嗜血桿菌	6.2	7.6	7.0
金黃色葡萄球菌	6.6	8.1	7.4
枯草芽胞桿菌	4.5	8.5	6.0-7.6
肺炎鏈球菌	7.0	8.36	7.6-7.8
化膿性鏈球菌	6.35	9.2	6.4-8.5
淋病奈瑟菌	6.8	8.3	7.5
真菌	1.5	8.5	3.8-6.0

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