第三章  培養基的制備

 

目前培養基的配制主要分為干粉培養基和新鮮培養基兩類。干粉培養基是將培養基原材料濃縮，噴霧干燥，然后根據要求將干粉原料按一定配比制成各種不同的培養基。干粉培養基在使用時，只需按說明書稱重，加入蒸餾水、分裝、高壓滅菌后即可使用。南于它具有使用方便、易于保存、質量穩定等優點，所以深受各微生物實驗室的歡迎。

 

第一節  培養基的制備方法

一、新鮮培養基的制備

    不同類型培養基制備的程序不盡相同。但配制一般培養基的主要程序為：調配、溶化、矯正pH、澄清過濾、分裝、高壓滅菌及檢定等步驟。

  1．調配

  按培養基處方準確稱取各種成分，混懸于蒸餾水或去離子水中。

  2．溶化

  將各種成分混勻于水中，最好以流通蒸氣溶化半小時，如在電爐上溶化應隨時攪拌，特別是含有瓊脂成分的更應注意防止燒焦和外溢。溶化完畢，應注意補足失去的水分。

    制備大量培養基時，除中性硬質玻璃容器外，還可以用不銹鋼鍋、搪瓷桶等容器加熱溶解，但不可用銅或鐵鍋，以免金屬離子進入培養基中，影響培養基酸堿度，最終影響細菌的生長。

    3．矯正pH

    pH比色計應準確可靠，一般培養基需矯正pH至7.4~7.6，此外亦有需要酸性或堿性的培養基。培養基在高壓滅菌后會有所變化，一般來說，用氫氧化鈉調節時，滅菌后會下降0.1~0.2；用碳酸氫鈉調節時，滅菌后會上升0.1左右。故矯正應掌握這種變化規律。

    4．分裝

    根據需要將培養基分裝于不同的三角燒瓶、試管等。分裝的量不宜超過容器的2／3以免滅菌時外溢。

    (1)基礎培養基。應常貯有無菌的基礎培養基，以便臨時分裝或配制鑒別培養基等。分裝的量根據使用目的和要求決定，但必須定量分裝，便于應用。一般分裝于三角燒瓶或鹽水瓶內，高壓滅菌后備用。

    (2)瓊脂斜面。分裝量為試管容量的1/5，滅菌后需趁熱放置成斜面，斜面長度約為試管長度的2/3。

   (3)半固體培養基。分裝量約為試管的1/3，高壓滅菌后直立凝固備用。

    (4)高層瓊脂。分裝量約為試管長度的1/3，高壓火菌后趁熱直立，待冷后凝固備用。

    (5)瓊脂平板。將高壓滅菌（或加熱融化）后的培養基，冷至50℃左右，以無菌手續傾入滅菌平皿中，內徑90mm的平皿注培養基約15-20ml，輕搖平皿底部，等凝固后即成。傾注培養基時切勿將皿蓋全部啟開，以免空氣中塵埃及細菌落入。

    新制成的平皿培養基（簡稱平皿），表面水分較多，不利于細菌的分離，通常應將平皿倒扣置于37℃培養箱內30分鐘，待平皿表面干燥后使用。

    5．高壓滅菌

    不同成分、性質的培養基，可采用不同的滅菌方法。高壓蒸汽滅菌法是其中一種，高壓滅菌的溫度與時間隨培養基的種類及數量的不同有所差別，  一般培養基121℃高壓滅菌30分鐘即可，含糖的培養基116℃高壓滅菌15分鐘，以免糖類被破壞。

    6．檢定

    每批培養基制成后必須檢定，將培養墓37攝氏度放置24小時，證明無菌，同時用已知菌種檢查細菌生長情況，符合要求方可使用。每批應注明制作日期、批號。無菌試驗培養基應在一周內使用。硫乙醇酸鹽培養基超過一周時，應水浴加熱驅氧后再使用。制好的培養基不宜保存過久，以少量勤做為宜。宜保存在4℃冰箱內，也可室溫保存，效期為2-3周。

二、干粉培養基的制備

    從20世紀80年代開始，我國培養基主要原材料迅速發展，并逐步商品化，這為我國干粉培養基生產奠定了良好的基礎。特別是自20世紀90年代以來，我國商品干粉培養基生產蓬勃發展，如雨后春筍。其生產方法主要采用球磨混勻法，因為此方法生產設備及生產工藝較為簡單，便于操作，產品損耗少，又可大批量生產，故生產成本較低，具有投資少收益大等優點。其生產方法簡述如下：首先選擇適宜的培養基原材料，經檢定合格后方可投產，即按照培養基處方成分比例加到含有不銹鋼或陶瓷球的球磨罐中，球磨一定時間后倒出，取小樣進行檢定，合格后分裝于合適的容器中，貼上標簽（應注明產品名稱、使用說明、批號、有效期、生產廠家等項日），方可銷售。

    干粉培養基使用時只需按標簽上的說明稱量、加水、分裝、高壓滅菌。不需調節pH。