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微生物培養基質控與圖解——染色液配制及染色法



錄入時間:2010-8-5 15:23:20 來源:青島龙8娱乐官方网站

 1.美藍染色法
    呂氏堿性美藍染色液
    美藍                  0.3g
    95%乙醇               30ml
    0.01%氫氧化鉀溶液    100ml
    將美藍溶解于乙醇中,然后與氫氧化鉀溶液混合。
    染色法:將涂片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1-3分鐘,水洗,待于,鏡檢。
    結果:菌體呈藍色。
    2.革蘭染色法
    結晶紫染色液
    結晶紫             lg
    95%乙醇            20ml
    1%草酸銨水溶液     80ml
    將結晶紫溶解于乙醇中,然后與草酸銨溶液混合。
    革蘭碘液
    碘        lg
    碘化鉀    2g
    蒸餾水    300ml
    將碘與碘化鉀先進行混合,加入蒸餾水少許,充分振搖,待完全溶解后,再加蒸餾水至300ml。
    沙黃復染色液
    沙黃       0.3g
    95%乙醇    10ml
    蒸餾水    90ml
    將沙黃溶解于乙醇中,然后用蒸餾水稀釋。
    染色法
    將涂片在火焰上固定,滴加結晶紫色液,染1分鐘,水洗。
滴加革蘭碘液。作用1分鐘,水洗。
   滴加95%乙醇脫色,約30秒;或將乙醇滴滿整個涂片,立即傾去,再用乙醇滴滿整個涂片,脫色10秒。水洗,滴加復染液,復染1分鐘。水洗,待干,鏡檢。
  結果
  革蘭陽性染色量很多因素的影響,與涂片厚薄、酒精脫色時間、染液儲存時間、細菌生長時期等有關。
3.耐酸性染色法(萋-倪二氏法)
    石炭酸品紅染色液
    堿性品紅    0. 3g
   95%乙醇    l0ml
    5%酚水溶液    90ml
將品紅溶解于乙醇中,然后與酚溶液混合。
    3%鹽酸-乙醇
    濃鹽酸    3g
    95%乙醇    97ml
復染液
  呂氏堿性美藍染色液
  染色法
  將涂片在火焰上加熱固定,滴加石炭酸品紅染色液,徐徐加熱至有蒸汽出現,但切不可使沸騰。染液如因蒸發減少時,應隨時添加。染5分鐘,傾去染液,水洗。
    滴加鹽酸-乙醇脫色,直至無紅色脫落為止(所需時間視涂片厚薄而定,一般為1~3分鐘),水洗。
   滴加呂氏堿性美藍染色液。復染30秒~1分鐘,水洗,待干,鏡檢。
    結果
    耐酸性細菌呈紅色,其他細菌、細胞等物質呈藍色。
    4.柯氏染色法
    染色液
    0.5%沙黃液
    0.5%孔雀綠液
    染色法
    將涂片在火焰上同定,滴加0.5沙黃液,并加熱至出現氣泡,2-3分鐘,水洗。
   滴加0.5%孔雀綠液,復染40~ 50秒,水洗,待干,鏡檢。
    結果
    布氏桿菌呈紅色,其他細菌及細胞呈綠色。
    5.奧爾特莢膜染色法
    染色液
    沙黃    3g
    蒸餾水    l00ml
    用乳缽研磨溶解。
    染色法
    將涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加熱至產生蒸汽后,繼續染3分鐘。水洗,待干,鏡檢。
    結果
    炭疽芽胞桿菌苗體呈褐色,莢膜呈黃色。
    6.瑞氏染色法
    染色液
   瑞氏色液    0.3g
  甲醇        60ml
  用乳缽研磨溶解。
  染色法
  涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1分鐘。加入等量蒸餾水( pH6.5),染色3~5分鐘,用蒸餾水沖洗,待干,鏡檢。
    7.鞭毛染色法
    染色液的配置
    甲液:稱單寧酸5g,氯化高鐵(FeCl3)1.5g,溶于100ml蒸餾水中,待溶解后加入1%的氧氧化鈉溶液1ml和15%的甲醛溶液2ml。
    乙液:稱2g硝酸銀溶于100ml蒸餾水中,在90ml乙液中滴加濃氫氧化銨溶液,到出現沉淀后,再滴加使其變為澄清,然后用其余10ml乙液小心滴加至澄清液中,至出現輕微霧狀為止(此為關鍵性操作,應特別小心)。滴加氫氧化銨和用剩余乙液回滴時,要邊滴邊充分搖蕩,染液當天配,當天使用,2~3天基本無效。
    染色法
在風干的載玻片上滴加甲液,4~6分鐘后,用蒸餾水輕輕沖凈。再加乙液,緩緩加熱至冒汽,維持約半分鐘(加熱時注意勿使出現下燥面)。在菌體多的部位可呈深褐色到黑色。停止加熱,用水沖凈,干后鏡檢,菌體及鞭毛為深褐色到黑色。
    堿性復紅染色法
    將0.5g堿性復紅染料溶解于20ml 95%乙醇中,然后用蒸餾水稀釋至100ml。如有不溶物時,可用濾紙過濾或靜置后取上清渡備用。
    注:本染色液系用于蘇云金芽胞內蛋白質毒素結晶的染色,借以與蠟樣芽胞桿菌相區別。

 

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