氰化鉀(KCN)培養基
成分:
蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
磷酸二氫鉀 0.225g
磷酸氫二鈉 5.64g
蒸餾水 1000ml
0.5%氰化鉀溶液 20ml
pH7.6
制法:將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min,放在冰箱內使其充分冷卻,每100ml培養基加入0.5%氰化鉀溶液2.0ml(最后濃度為1:10000),分裝于12mm×100mm滅菌試管,每管約4ml,立刻用滅菌橡皮塞塞緊,放在4℃冰箱內,至少可保存兩個月,同時,將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基,分裝試管備用。
氧化酶試驗
試劑:
1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液:少量新鮮配制,干冰箱內避光保存.
1%α-萘酚-乙醇溶液。
試驗方法:取白色潔凈濾紙沾取菌落,加鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴,陽性者呈現粉紅色,并逐漸加深;再加α-萘酚溶液一滴,陽性者于半分鐘內呈現鮮藍色,陰性于兩分鐘內不變色。以毛細吸管吸取試劑,直接滴加于菌落上,其顯色反應與以上相同。
硝酸鹽培養基
成分:
硝酸鉀 0.2g
蛋白 5g
蒸餾水 1000ml
pH7.4
制法:溶解,校正pH,分裝試管,每管約5ml,121℃高壓滅菌15min。
硝酸鹽還原試劑:
甲液:將對氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。
乙液:將甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100ml中。
試驗方法:接種后在36±1℃培養1~4d,加入甲液和乙液各一滴,觀察結果:硝酸鹽還原為亞硝酸鹽時于立刻或數分鐘內顯紅色。
注:本試驗陰性的原因有三:細菌不能還原硝酸鹽;亞硝酸鹽繼續分解,生成氨和氮;培養基不適于細菌的生長。如欲檢查培養基中硝酸鹽是否未被分解,可再加入鋅粉少許,可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽而呈現紅色。
細胞色素氧化酶試驗
試劑:
1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液.
1%α-萘酚-乙醇溶液。
試驗方法:取37℃(或低于37℃)培養20h的斜面培養物一支,將兩種試劑各2~3滴,從斜面上端滴下,并將斜面略加傾斜,使試劑混合液流經斜面上的培養物,如系平板培養物,則可用試劑混合液滴在菌落上。
結果:于2min內呈現藍色者為陽性。陽性培養物大多數于半分鐘內出現強陽性反應,2min以后出現微弱或可疑反應均作為陰性結果。
過氧化氫酶試驗
試劑:
3%過氧化氫溶液:臨用時配制。
試驗方法:挑取固體培養基上菌落一接種環,置于潔凈試管內,滴加3%過氧化氫溶液2ml,觀察結果。
結果:于半分鐘內發生氣泡者為陽性,不發生氣泡者為陰性。
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