1. 分析目標化合物
苯并噻二唑、苯并酸(苯并〔1,2,3〕噻二唑-7-羧酸)
2.儀器設備
帶紫外分光光度檢測器的高效液相色譜儀及液相色譜—質譜儀。
3.試劑
除下列試劑外,使用附錄2所列試劑。
磷酸緩沖溶液(pH8): 第1液:稱取71.64g磷酸氫二鈉十二水和物,加水溶解至1,000mL 。第2液:稱取31.21g磷酸二氫鈉二水和物,加水溶解至1,000mL。將473.5mL第1液與26.5mL第2液混和,加水至1,000mL。
4.
標準品
苯并噻二唑:含苯并噻二唑99%以上,熔點為133℃。
苯并〔1,2,3〕噻二唑-7-羧酸(以下稱”苯并酸”): 含苯并酸99%以上,熔點為261℃~262℃。
5.試驗溶液的制備
a 苯并噻二唑試驗溶液
① 提取方法
(I) 將樣品粉碎后,過420μm 標準網篩,稱取其10.0g,加入20mL磷酸緩沖溶液(pH8),放置2小時。
加入100mL丙酮,攪拌3分鐘后,用涂布1cm 厚硅藻土的濾紙,抽濾至磨口減壓濃縮器中。取出濾紙上的殘留物,加入50mL丙酮和20mL磷酸緩沖溶液(pH8),攪拌3分鐘后,按上述同樣操作,濾液合并于減壓濃縮器中,40℃以下濃縮至約50mL。
加入50mL 10%氯化鈉溶液,滴加約1mL 0.2mol/L 氫氧化鈉溶液,調整pH7.5~8.5 ,將溶液轉移至300mL分液漏斗中。用100mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液洗滌上述減壓濃縮器的茄型瓶,合并洗滌液于分液漏斗中。用振蕩器激烈振蕩5 分鐘后,靜置,乙醚和正己烷層移入300mL三角瓶中。水層中加入50mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液,按上述同樣操作,合并乙醚和正己烷層于上述三角瓶中。
(II) 加入適量的無水硫酸鈉,不時振搖、混合,放置15分鐘后,濾入磨口減壓濃縮器中。再用20mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液洗滌三角瓶,以此洗滌液洗滌濾紙上的殘留物,重復操作2次。合并兩次洗滌液于減壓濃縮器中,40℃以下除去乙醚和正己烷。
殘留物中加入30mL正己烷,轉移至100mL分液漏斗中。加入30mL正己烷飽和的乙腈,用振蕩器激烈振蕩5分鐘后,靜置,轉移乙腈層于磨口減壓濃縮器中。正己烷層中加入30mL正己烷飽和的乙腈,按上述同樣操作,重復2次,合并乙腈層于減壓濃縮器中,40℃以下除去乙腈。殘留物中加入5mL乙醚:正己烷(3:17)混合溶液溶解。
② 凈化方法
在內徑15mm,長300mm 色譜管中,注入5g懸浮在正己烷中的柱色譜用合成硅酸鎂,其上再加入約5g無水硫酸鈉,放出正己烷至柱上端余留少量正己烷。柱中注入a 提取方法所得的溶液后,加入50ml乙醚:正己烷(3:17)混合溶液,舍棄流出液。再加入150mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液,收集流出液于磨口減壓濃縮器中,40℃以下除去乙醚和正己烷。殘留物中加入乙腈:0.5%乙酸溶液的混合溶液溶解,準確至5mL,此為試驗溶液。
b 苯并酸試驗溶液
① 提取方法
按照a 苯并噻二唑試驗溶液中① 提取方法中(I)進行操作所得的水層中,加入0.5mL磷酸,使之成酸性。加入50mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液,用振蕩器激烈振蕩5分鐘后,靜置,乙醚和正己烷層移入300mL三角瓶中。水層中加入50mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液,按上述同樣操作,合并乙醚和正己烷層于上述三角瓶中。加入適量的無水硫酸鈉,不時振蕩、混合,放置15分鐘后,過濾至磨口減壓濃縮器中。再用20mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液洗滌三角瓶,以此洗滌液洗滌濾紙上的殘留物,重復操作2次。合并2次洗滌液于減壓濃縮器中,40℃以下除去乙醚和正己烷。殘留物中加入5mL乙酸乙酯:甲醇(4:1)混合溶液溶解。
② 凈化方法
在內徑15mm,長300mm色譜管中,注入5g懸浮在乙酸乙酯中的柱色譜用合成硅酸鎂,其上再加入約5g無水硫酸鈉,放出乙酸乙酯至柱上端余留少量乙酸乙酯。將① 提取方法中所得溶液注入柱中后,注入50mL乙酸乙酯:甲醇(4:1)混合溶液,舍棄流出液。再加入200mL乙酸乙酯:甲醇(7:3)混合溶液,收集流出液于磨口減壓濃縮器中,40℃以下除去乙酸乙酯和甲醇。殘留物中加入0.5%乙酸溶液:甲醇(3:1)混合溶液溶解,準確至2mL ,此為試驗溶液。
6.操作方法
a 定性試驗
按照下列操作條件進行試驗。試驗結果必須與同樣操作條件下標準品的結果一致。
①苯并噻二唑的試驗
操作條件
柱填充劑:十八烷基甲硅烷基化硅膠 (粒徑5μm)
柱: 內徑4.6mm、長150mm 不銹鋼管。
柱溫: 40℃
檢測器: 波長254nm
流動相: 乙腈:0.5%乙酸溶液(2:3)的混合溶液。調整流速使苯并噻二唑14~16分鐘流出。
②苯并酸的試驗
操作條件
柱填充劑:十八烷基甲硅烷基化硅膠(粒徑5μm)。
柱: 內徑4.6mm、長150mm 不銹鋼管。
柱溫: 40℃
檢測器:波長235nm
流動相:0.5%乙酸溶液:甲醇(3:1)混合溶液,調整流速使苯并酸24~26分鐘流出。
b 定量試驗
根據與a 定性試驗相同的操作條件下所得試驗結果,用峰高法或峰面積法定量,求出苯并噻二唑和苯并酸的含量,按照下式,求得含苯并酸的苯并噻二唑的含量。
苯并噻二唑(包括苯并酸)含量(mg/kg)=A+B×1.17
A:酸式苯并-S-甲基的含量(mg/kg)
B:酸式苯并酸的含量(mg/kg)
c 確證試驗
在與a 定性試驗相同的操作條件下,用液相色譜--質譜儀測定。試驗結果必須與標準品的一致。此外,必要時用峰高法或峰面積法定進行量。
7.定量限
0.01 mg/kg
8.注意事項
分別對苯并噻二唑和苯并酸定量,將苯并酸含量乘以系數換算成苯并噻二唑的含量,其和為分析值。