一、目的要求:
本實驗是通過簡單的生化測定來了解蘇云金桿菌的生化鑒定技術。
鑒定蘇云金桿菌的生化指標是:V、P反應,卵磷脂酶,蛋白水解,吐溫酶,水楊素,七葉靈、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、幾丁質酶、精氨酸脫羥酶等。
二、實驗材料:
1、 天平 2、電爐 3、藥勺4、量筒5、燒杯6、pH試紙7、高壓鍋(手提式)8、接種環
三、實驗內容:
1、糖利用:
蛋白胨 1%
瓊脂 2%
蔗糖(甘露糖) 1%(水楊素為0.5%)
1%酸性復紅水溶液 0.5%
蛋白胨加熱溶于水中,加入酸性復紅水溶液。分別加入一種糖加熱溶解,以不加糖的蛋白胨作對照。分裝試管,調pH至7.58磅滅菌30分鐘。
接種后于30℃恒溫培養檢查產酸情況,若培養基變紅者為正反應。
2、七葉靈利用:
牛肉膏 1%
七葉靈 0.5%
瓊脂 2%
另配5%三氯化鐵水溶液單獨滅菌。培養基溶后,先將三氯化鐵每皿滴入2滴,后倒平板混勻。凝固后電接菌種,30 ℃培養3-5天。菌苔周圍出現深褐色區為陽性反應。
3、V、P反應:
蛋白胨5克 葡萄糖5克 NaCl 5克 蒸餾水 1000毫升
分裝試管 8磅30分鐘滅菌
接菌后于37 ℃培養24小時,每管加入4%KOH溶液10-20滴,再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后,用力振蕩。然后置37 ℃下保溫0.5小時。培養物出現紅色即為V、P正反應,并設未接種的試管為對照。
4、淀粉水解試驗:
牛肉膏 5克 NaCl 5克 可熔性淀粉 5克 瓊脂 10克 蒸餾水 1000毫升
將試驗菌點種于平板上,徒長出菌落后,收Lugoc氏碘液傾注于平板表面,菌落四周有透明圈者為陽性放應。
5、菌膜形成試驗:
肉湯試管接種,30。C靜止培養24小時后觀察菌膜形成情況及搖動后膜破粹情況。
6、卵磷脂酶試驗
蛋白胨1% 酵母膏 0.3% NaCl 0.5% 瓊脂 2% 卵黃2-3% pH 7-7.2
用75%酒精將新鮮雞蛋進行表面消毒,并用經火焰滅菌的鑷子將蛋兩端各打一個孔,傾去蛋清,然后用無菌5ml吸管取出卵黃,加至觸化后冷卻至50。C左右的培養基中,使卵黃含量為培養基總體積的2~3%。混勻后倒平板,點接菌種24小時后觀察,菌液邊緣出現混濁圈者表示卵鱗酯酶為陽性。
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