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狂犬病疫苗分子生物學診斷:



錄入時間:2009-8-7 11:20:27 來源:青島龙8娱乐官方网站

狂犬病疫苗分子生物學診斷:
核酸雜交技術并未廣泛應用于狂犬病的研究。PCR技術于1990年首次應用于鼠腦內狂犬病病毒的檢測,后來Tordo等人用于狂犬病的診斷研究。狂犬病病毒的PCR擴增分為兩步:①病毒RNA反轉錄成cDNA;②cDNA的PCR擴增。PCR引物設計主要選擇在N基因內,上游引物大多數包含N基因的轉錄起始信號及起始密碼子,下游引物包含終止密碼子,這樣可以擴增N基因全部編碼區,有的引物延伸至M基因的保守區。也有在NS基因、G基因或L基因內設計引物者。但作為診斷目的時,一般不選擇偽基因內的引物。被檢樣品通常采自于腦干,也可以來自于唾液或唾液腺。RNA模板制備、RNA反轉錄PCR操作及注意事項參見第十五章有關節段。根據被檢樣品PCR產物大小與設計引物間序列大小是否一致,即可確診。如有條件,也可采用測序的方法,讀出被檢樣品PCR擴增產物的部分序列,可更準確地作出診斷。Saramento等對巴斯德研究所1989~1991年收集的100份腦樣品進行PCR擴增,與其它診斷方法如快速酶聯免疫測定、熒光抗體測定和細胞感染試驗相比較,陽性率及符合率均為100%。PCR具有快速、特異、操作簡單等特點,在狂犬病診斷中具有很好的應用前景。

 

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