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狂犬病疫苗血清學診斷



錄入時間:2009-8-7 11:19:59 來源:青島龙8娱乐官方网站

  主要用于疫苗效果檢查或流行病學調查,包括小鼠中和試驗、空斑減少中和試驗、血凝抑制試驗等。WHO推薦以快速熒光灶抑制試驗(RFFIT)代替小鼠中和試驗。試驗時血清樣品首先滅活,作倍比稀釋,同時設陰、陽性血清對照。病毒通常采用標準固定毒CVS株。細胞為BHK21細胞系,細胞濃度為105/0.2ml。首先將稀釋的被檢及對照血清0.1ml分別加入96孔培養板中,再在各血清孔中分別加入0.1ml標準病毒稀釋液(100TCID50),混勻,37℃中和1.5小時;然后每孔加入105細胞,于37℃5%CO2溫箱培養24小時,次日傾棄培養液,用pH7.60.01mol/LPBS洗一次,用3%冷丙酮液于-20℃固定10~15分鐘,棄之,干燥后,加熒光標記的抗狂犬病病毒IgG液,室溫感作30分鐘,餾水洗滌3次(5min/次),再以0.1%伊凡思藍染色30秒,餾水洗滌3次(3min/次)。封載后鏡檢。在陰、陽性對照成立的基礎上,比較實驗組和陰性血清組的熒光灶,實驗組中能使熒光灶抑制大(等)于50%的血清最高稀釋度(倍數),即為被檢血清的中和抗體滴度。一般情況下,陽性對照血清的起始稀釋效價為2IU/ml。待測抗體的單位,可通過計算待測抗體和標準血清滴度的比值得出。其公式:〖JZ〗待測抗體單位(IU/ml)=〖SX(〗待測血清IF抑制滴度〖〗標準血清IF抑制滴度〖SX)〗×2一般以0.5IU/ml判定為抗體陽轉的最低效價,即表示機體對狂犬病病毒感染具有抵抗力。此外,為了檢測動物體內的狂犬病病毒抗體,李金中等還報道了ELISA阻斷法,即先包被已知陽性抗原,用被檢血清與固定抗原感作,洗滌后,再加已知酶標記的陽性血清,洗滌顯色后,出現顏色反應則表明待測血清中無特異性抗體。未呈現顏色反應的樣品,說明血清中有狂犬病病毒特異性抗體,酶標抗體的結合被阻斷,因此判定為狂犬病病毒抗體陽性。此外,還有斑點免疫測定、對流免疫電泳、Western印跡等診斷方法,在此不一一贅述。在人畜被狗等動物咬傷后,不可將這些動物立即殺死,應關在鐵籠內飼養2~3周。如果動物在這幾周內不出現狂犬病的癥狀,按照多年來通用的規定,可以認為此動物未患狂犬病。但如前述,由于近年來常在狂犬病疫區發現“頓挫型感染”,這些動物本身可能不出現狂犬病的癥狀,但其唾液內含有病毒。應用上述血清學試驗作雙份血清檢查,可能有助于這些頓挫型患畜的檢出。

 

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