樹莓是近年來世界上發展最為迅速的、集營養與保健于一身的第三代新興水果。由于現有樹莓繁苗方式落后，所采用的扦插、根孽、壓條等傳統繁殖方法繁殖系數低、速度慢，致使苗木供應不足，成為目前發展樹莓生產的主要限制因素。本試驗探討了紅樹莓系列品種― 澳洲紅的頂芽及腋芽培養技術，旨在解決這一品種繁育難的問題。
1 材料和方法
1.1 材料
材料取自牡丹江林業科學研究所引種的澳洲紅1 年生枝條。外植體的選取分為兩種，一是生長旺季時枝條中部帶腋芽莖段；二是早春腋芽萌動前，取枝條于室內水培，腋芽剛萌動時剝取的莖尖。
1.2 滅菌方法
取健壯樹莓植株，將枝條除去葉片，在自來水下用細軟毛刷輕刷表面，并吸干表面水分，剪成2 一3cm 長帶芽的莖段。按以下程序進行滅菌處理：將材料放人高溫滅菌過的燒杯中一加入70 ％的酒精，浸5 ~ 7s 一倒出酒精，用無菌水沖洗2 遍一用0.1 ％的HgCl 消毒8 ~10min ，用無菌水沖洗5 遍，每次2 min 一切去材料受傷面，將帶芽莖段切成長度為0.5 ~ 1.0cm 的單芽小段，或剝除芽鱗切取長度5 一7mm的莖尖，接種培養。
1.3 起始培養
取消毒過的外植體莖尖和帶芽莖段，分別接到起始培養基上。培養基各項指標為：MS + 6BA0.2 ~1.5mg/L，蔗糖30 g/L ，瓊脂4 g/L , pH 5.6 ~ 5.8 ，培養溫度25 士2 ℃ ，光強1500~ 2000lx ，光周期12 ~ 14h / d。
1.4 增殖培養
當外植體萌發展葉分化成芽叢后，將叢生芽分成單株，轉接到MS 附加不同激素濃度的繼代培養基上進行增殖培養。增殖培養基為MS + 6BA 0.5 ~ 1.5 十NAA0.05~0.2mg/L 。將各階段的激素濃度分為3 ~ 4 個梯度，采用不完全實施的正交設計，每處理20 個外植體，5 次重復。
1.5 生根培養及煉苗
選取生長健壯的單個叢生芽接種于培養基l / 2MS + 6-BA 1.0mg/L, 2 ％蔗糖上。根長至0.5 ~1 cm 時，把試管瓶移到室溫條件下進行煉苗，一段時間后進行移栽。
2 結果與分析
2.1 外植體的選擇對樹莓組培苗的影響
采用生長旺季時枝條中部帶腋芽莖段作為外植體，存在三個方面的問題。一是外植體大，消毒不完全，污染率高；二是外植體易褐變，實驗表明培養基中加人0.25 ％的VC 可有效抑制褐變；三是將得到的無菌小苗轉人增殖培養時，玻璃化現象嚴重，增加瓊脂濃度或降低6-BA 濃度均不能有效抑制玻璃化。而用莖尖作外植體時，由于腋芽表面被鱗片，在較長時間消毒后，內部芽體損傷較小，既保證了消毒效果，又避免了消毒對培養材料的損害。同時枝條經水培后，體內酚類物質減少，褐變現象消失。接種于起始培養基中，10d 后，腋芽基部開始有膨大，腋芽開始萌發，40天左右可形成叢生芽團，但不同的6-BA 濃度，其誘導的效果有所不同：低濃度的6-BA ，誘導的芽數量少但健壯；高濃度的6-BA ，誘導的芽數量多但較細。綜合來看，6-BA 濃度1.Omg/L 時，誘導效果最好，芽較多且生長健壯。
2.2 芽誘導分化及叢芽的增殖
將起始培養中未污染的芽長至2 一3 cm 時轉接于增殖培養基上。20d 后，每個芽體可分化出1 一11 個新芽，外源激素是誘導芽增殖的關鍵物質，適宜的激素組合可以使芽的增殖系數達到最高。實驗結果表明，隨著激素濃度的增加，增殖系數變大，但分化出的芽矮小細。綜合來看培養基MS 十6-BA 1.Omg/L 十NAA 0.2mg/L 是工廠化育苗較適宜的增殖培養基。芽長勢好，且健壯。
2.3 根的誘導和試管苗煉苗移栽
單個叢生芽接種于生根培養基l / 2Ms + IBA1.0mg/L 、2 ％蔗糖上，10d 后切口基部出現白色的根狀突起，25d 后，形成較多的根，每株生根4 條以上，生根率為80 ％以上。
移栽前5 天左右，在室內將封口膜打開1 / 3 左右，使幼苗與空氣有一定接觸。2 天后，移栽到馴化溫室內，使幼苗完全暴露在空氣中，要適當遮蔭，避免高溫和強光直接照射，3 天后即可移栽。移栽時將幼苗取出，小心洗去根部的培養基，去掉老葉，放人鋪有濕報紙的盒子，要注意保濕。栽培基質為消毒后的黃沙，用鑷子劃痕后，夾住幼苗根部，插人至第一輪葉，用手小心壓緊，用薄膜覆蓋，保持溫度在21 ℃ 一25 ℃ ，控制好水分和溫度，移栽成活率可達80 ％以上。
3 小結
3.1 培養材料的選擇是樹墓組培快繁的關鍵，試驗表明莖尖是最合適的培養材料，腋芽表面的鱗片可避免長時間消毒對內部芽體的損害，同時，培養材料小，褐化現象明顯減少。
3.2 掌握HgCl 消毒外植體時間是關鍵，消毒時間太短不能徹底滅菌，時間過長則可能殺死部分外植體，合適時間以10min 為宜。同時，消毒可分兩次完成，每次5 min ，中間用無菌水清洗3 次，可減少Hgcl 對外植體的損害。
3.3 澳洲紅組織培養中，MS + 6BA 1.0mg/L + NAA 0.2mg/L 是較適宜的增殖培養基，l /2MS + IBA1.0mg/L , 2 ％蔗糖是較適宜的生根培養基。試管苗生根數在4 條以上，且根長1.Ocm 以上時，移栽成活率可達80 ％以上。

上一篇：鐵皮石斛組織培養研究進展三

下一篇：宿根福祿考組織培養及快繁技術