(1)抗獨特型抗體疫苗: 抗獨特型抗體是70年代后 期開 始逐漸發展起來的一種新型生物制劑，指的是針對抗體可變區的抗體，由于后者和誘導產生 前者抗體的抗原一樣，能與前者抗體的可變區結合，因此后者可以模擬抗原表位的構象，代 替抗原作為疫苗使用。建立抗獨特型抗體疫苗的理論根據是1974年Jerne提出的免疫網絡 調節學說 ，該學說認為，機體在受抗原刺激后的免疫調節是通過獨特型和抗獨特型之間的相互反應進 行的。獨特型存在于抗體分子的可變區內。在病毒感染或進行病毒免疫時，機體產生的中 和抗體叫做抗體1(Ab1)，在抗體1 Fab可 變區的抗原結合位點上具有獨特的氨基酸序列，將其稱為獨特型(Id)，利用抗體1接種動物, 可以誘導機體產生針對該獨特型的抗獨特型抗體(抗體2), 抗體2可變區結合位點和始動病 毒抗原的結構構 象相同，因此可以利用抗體2代替病毒抗原，誘導機體產生抗體3，抗體3和抗體1相似，能夠 中和始動病毒的毒力，從而形成保護性免疫應答。近年來發現，抗體2(Ab2)在功能上具有 異質 性，分為Ab2α、Ab2β、Ab2γ、Ab2δ等4型，其中Ab2β與Ab1的抗原結合位點相對應 ，在構 象上與始動病毒的抗原表位相同，可以作為抗獨特型抗體疫苗應用，而其它型Ab2只識別Ab1 的非抗原結合部位，不能作為抗獨特型抗體疫苗使用。抗獨特型抗體作為疫苗，在 制備上較一般病毒疫苗復雜，需要首先制備多克隆或單克隆抗體1, 并需要進行抗體的純化 及鑒定，因此抗獨特型抗體主要適用 于那些目前尚不能培養或很難培養和產量低以及直接用病毒作疫苗具有潛在危險 性的病毒。目前針對乙型肝炎病毒、狂犬病病毒、人脊髓灰質炎病毒、雞新城疫病毒、呼腸 孤病毒以及委內瑞拉馬腦炎病毒等的抗獨特型抗體 的研究較為活躍，其中針對乙型肝炎病毒表面抗原和呼腸孤病毒S1衣殼抗原的抗獨特型抗體 在實驗動 物上證明具有很好的保護作用。另外, 針對仙臺病毒特異性T淋巴細胞受體的抗 獨特型抗體 可以在小鼠引起細胞毒性T細胞應答，并能保護小鼠抵抗病毒攻擊。由于用抗獨特型抗體 較之于用天然的病毒抗原免疫誘導的中和抗體水平低，抗獨特型抗體 在應用時, 也需要與一定的載體如鑰孔帽貝血藍蛋白或LPS進行偶聯，或交聯后輔以佐劑， 并采用適當的劑量進行免疫。因此, 抗獨特型抗體在應用到實際之前尚需作很多工作。
(2)亞單位疫苗： 應用化學的方法從病毒粒子中分離出保護性抗原而制成的 疫苗稱為亞單位疫苗，又叫化學疫苗。如采用Triton X100 、NP40或其它非離子去污劑 或 蛋白酶裂解病毒, 分離病毒的糖蛋白或衣殼蛋白,再將糖蛋白或衣殼蛋白嵌入人工制備的脂 質體或輔以佐劑后即可用于免疫動物。例如狂犬病病毒糖 蛋白通過正辛基βD吡喃葡糖苷(一種非離子去污劑)裂解下來以后，糖蛋白具有良好 的免 疫原性；將糖蛋白嵌入脂質體后免疫動物，其誘導的抗體水平大大提高，并能保護動 物 對街毒的攻擊。近年來還報道了通過蛋白酶處理去除病毒核酸的口蹄疫病毒VP1亞單位疫苗 和 流感病毒的血凝素/神經氨酸酶亞單位疫苗等。在亞單位疫苗基礎上，還可以將分離到的 亞 單位蛋白進行裂解，如采用溴化氰(CNBr)裂解，制備出多肽疫苗。例如，狂犬病病毒糖蛋白 經CNB r裂解后，可產生Cr1、Cr2…Cr7等7個多肽片段，其中Cr1、Cr3、Cr4可以誘導機體產生中和 抗體， 多肽疫苗是合成肽疫苗研究的前身，與合成肽一樣，存在合適的構像與功能的關系問題。亞 單位疫苗 和多肽疫苗，都是病毒粒子的一部分，但不含有核酸，因此非常安全；但亞單位疫苗和多肽 疫苗的免疫原性較低，需要與佐劑合用，或偶聯到適當的載體上應用。
(3)合成肽疫苗： 病毒性 抗原往往含有多種抗原成分，其主要抗原成分即保護性抗原只有1～2種，在保護性抗原分子 上又往往有多個抗原決定簇即抗原表位。其中只有1～2個主要抗原表位決定著病毒的免疫 力。 根據病毒的核苷酸序列推導的病毒蛋白的一級結構，結合單克隆抗體分析等技術，能夠確定 出病毒蛋白的主要抗原表位中的氨基酸序列，利用化學的方法可以人工合成這一肽段，以該 肽段作為抗原而制成的疫苗即合成肽疫苗。目前有關合成肽疫苗研究較多的, 是口蹄疫病毒 (F MDV)VP1蛋白的第141～160和200～231位氨基酸肽段。其中用FMDV 141～160肽段和佐 劑免 疫后, 可以誘導豚鼠產生高水平的中和抗體，并能保護強毒的攻擊。在牛和豬體內試驗也獲 得 了保護性免疫應答。最近Langeveld等發現，犬細小病毒VP2蛋白氨基末端的氨基酸序列在所有病毒之間是相同 的 。用針對該位點的單克隆抗體可在體外證實其對病毒的中和作用。因此根據該部位的氨基酸 序列合成了兩條具有部分 重疊的15肽，與鑰孔帽貝血藍蛋白連接后，分別免疫犬及貂，只需一次注射150μg劑量，即 可獲得滿意的保護效果。狂犬病病毒及流感病毒的合成肽疫苗研究也取得了一定進展。合成肽 疫苗不含有病毒核酸，十分安全，但合成肽疫苗在應用前需要首先偶聯到載體上，或和佐劑 混 在一起，其中合成肽只提供了抗原的B細胞表位, 而載體(β半乳糖苷酶、 鑰孔帽貝血藍 蛋白、卵清蛋白17 肽等)則提供了抗原的Th細胞表位, 只有當合成肽與載體偶聯在一起時, 才能被Th細胞識別, 從而引起B細胞產生中和抗體。在同一載體上偶聯多個合成肽，可以制備成多價苗或多聯 苗。合成肽疫苗主要適用于由 連續氨基酸序列組成的抗原表位, 亦可用于摸擬由不連續氨基酸構成的抗原表位的研究。
(4)基因工程亞單位疫苗: 在從完整病毒粒子 制備具有免疫原性的亞單位疫苗時，由于抗原量的限制，制備過程復雜，成本高。采用基因 工程 的方法，人們不僅能夠克隆得到編碼病毒保護性抗原的基因，而且能夠在體外對其進行改造 或修飾，并重新轉移到異源生物宿主體內或培養細胞中，使病毒蛋白獲得大量表達。用于 表 達病毒蛋白的載體，隨著基因表達的宿主細胞不同而異，采用原核細胞(大腸桿菌)表達， 可選用市售的非融合型表達載體如pKK2233等、分泌型表達載體pINⅢ系統等以及融合蛋白 表達載體 pGEX系統等，它們分別含有tac(trplac)啟動子、Ipp(脂蛋白基因)啟動子和tac啟動子等 ，亦可采用λ噬菌體的P〖WT6BZ〗L〖HT5SS〗和P〖WT6BZ〗R〖HT5SS〗啟動子。在哺乳動物 細胞中進行表達時，可選用整合型表達載體如 pSV40系列、pBPV系列和pSRV系列等，亦可以利用非整合型表達載體如多角體病毒、痘苗病 毒和腺 病毒等。最早研究的獸用基因工程亞單位疫苗之一是口蹄疫病毒 VP1基因工程亞單位疫苗。 綜 合自1981年以來德、英、美等幾個研究組的研究報道, 表明通過大腸桿菌表達的口蹄疫病毒 VP1亞單位疫苗對豬、牛、羊等均有較好的免疫原性, 并能提供免疫保護作用。在獸疫上具有重要性的其它病毒如雞A型副流感病毒、貓泛白細胞減少癥病毒、豬 傳染性胃腸炎病毒、水泡性口炎病毒以及狂犬病病毒的保護性抗原基因等，也有在大腸桿菌 中表達的報道，但是或則產量不高，或則免疫原性差，這可能與大腸桿菌不具有翻譯后加工 功能 等特性有關。為了獲得具有良好免疫原性的病毒保護性抗原亞單位疫苗, 并對其功能進行 深入研究， 近年來，經常采用真核生物細胞作為表達宿主。人的乙型肝炎病毒表 面抗 原是在真核細胞中研究較早的基因工程亞單位疫苗之一。在酵母細胞和小鼠成纖維細胞中(N IH3 T3)中表達的表面抗原顆粒與人血漿中的蛋白顆粒相同。單純皰疹病毒1型(HSV1)表面糖蛋 白 在CHO細胞中亦獲表達，以該重組糖蛋白免疫小鼠, 小鼠對HSV1具有抵抗作用。但是哺乳 動物培 養細胞表達水平往往較低。近年來，以桿狀病毒作為載體表達異源病毒結構蛋白的研究越 來越多，桿狀病毒系昆 蟲病毒，這種病毒能夠在宿主細胞內產生大量的蛋白晶狀體——多角體蛋白，這些蛋白覆蓋 并保護 著核內的病毒粒子。該蛋白的表達受多角體蛋白啟動子調控。Prehaud等和Fu等分別以多角 體 病毒為載體, 在多角體蛋白啟動子調控下于昆蟲細胞內表達了狂犬病病毒的糖蛋白和核蛋白 。在免疫小鼠、猴及浣熊后均可保護動物抵抗狂犬病病毒的致死性攻擊。通過痘苗病 毒等在細胞內表達的外源性病毒蛋白, 經提純后對動物也具有良好的免疫原性。
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