6、操作步驟
6.1活菌計數培養
6.1.1按無菌操作稱取食品檢樣25g（mL）放人均質器中，加O.1％蛋白陳水225ml，低速攪動1min——2oin，使之均質化，作為1：10稀釋液。
6.1.2以上述1：10稀釋的均質液按1mL加0.1％蛋白陳水9ml做成10（-2）——10（-6）的系列稀釋液。
6.1.3吸取各稀釋液1ml分別放人兩個滅菌平皿內。每個平皿澆注約50℃的SPS瓊脂15ml——20ml，仔細轉動平皿，使稀釋液和瓊脂充分混勻。
6.1.4上述瓊脂平板凝固后，倒置于厭氧培養裝置內，于36℃士1℃培養24h。
6.1.5選取長有30個～300個黑色菌落的平板，計數黑色菌落數。
6.2確證試驗
6.2.1由平板上任取10個黑色菌落，分別按種FT培養基，于36℃士1℃培養18h—24h。
6.2.2用上述培養液涂片，革蘭氏染色鏡檢。產氣莢膜梭菌為革蘭氏陽性粗大桿菌，其耐熱株可能形成卵形穿抱，位于菌體中央或近端，其寬度一般不大于菌體。
6.2.3角接種環（針）穿刺接種動力一硝酸鹽培養基，于30℃士1℃培養24h，觀察接種線的生長情況，判斷有另動力。然后，滴加甲蔡胺液和對氨基苯磺酸液各0.5mL，觀察硝酸鹽是否被還原。產氣莢膜梭菌無動力，能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。
6.2.4取生長旺盛的FT培養液1mL接種于含鐵牛乳培養基，在46℃水浴中培養2h后觀察有無“暴烈發酵”現象，5h內不發酵者為陰性。產氣莢膜梭菌發酵乳糖，凝固酪蛋白并大量產氣，呈“暴烈發酵，現象，但培養基不變黑。
6.2.5用接種環取FT培養液點種于卵黃瓊脂平板（每張平板至少可接種10點），于30℃士1℃厭氧培養24h，觀察接種點的變化。產氣英膜梭菌產生卵磷脂酶，分解卵黃中的卵磷脂，接種點的底部及周圍形成乳白色的棍濁帶6.3菌數計算根據黑色菌落的計數（6.1.5）和確證試驗的結果（6.2），計算每克（毫升）食品檢樣的含菌數。
例如：10（-4）稀釋液的平板長有黑色菌落l00個，而供做確證試驗的10個菌落中有7個被確證為產氣英膜梭菌，則每克（毫升）食品檢樣所含產氣莢膜梭菌數為：100*0.7*10（4）=7*10（5）   
   

 

上一篇：食品衛生微生物學檢驗產氣英膜梭菌檢驗1——GB

下一篇：食品衛生微生物學檢驗蠟樣芽胞桿菌檢驗1——GB