5.1.4.2 IMS分離5.1.4.2.1試劑制備A由10火SLA型緩沖液配制稀釋的1火SIA型緩沖液用試劑水作為稀釋劑每個樣品制備lmL的1只SIA型緩沖液。注意：長時間在O℃ ～4℃ 儲存后，可能會在IOxSL一A型緩沖液中形成一些結晶沉淀。為了確保這些沉淀的結晶能夠再溶解，使用前應將其置室溫（15℃ ～22℃ ）恒溫H加lm工一10只SLA型緩沖液和1 mL 10*SL B型緩沖液到一側平面試管中5.1.4.2.2卵囊捕獲A定量轉移10m工水樣濃縮物到含有SI、緩沖液的一側平面試管中H將抗隱抱子蟲抗體和抗賈第鞭毛蟲的磁微粒原液置于漩渦混合器上攪拌，以便使珠粒懸浮通過倒置試管的方法保證珠粒再懸浮．并確定底部沒有殘留的小團。C在含有水樣濃縮物和SI、一緩沖液樣品的一側試管中各加100川上述懸浮的微粒。D將樣品試管固定到旋轉式的攪拌器上，在大約25r/min的條件下至少旋轉lh E至少旋轉lh后．將試管從攪拌器上取下，然后再將其放在磁粒濃縮器（MPC一1）上，并將試管有平面的一邊朝向磁鐵F用手柔和地大約900角頭尾相連地搖動試管，使試管的蓋頂和基底輪流上下傾斜以每秒大約傾斜一次的頻率持續2minG如果讓MPC-I中的樣品靜置105以上，就要在進行下一個步驟之前，重復前一個（即步驟F)步驟。H立即打開頂端的蓋，同時將保持在MPC一1上的試管中的所有上清液倒到一個適當的容器中做這一步驟時，不要搖動試管，也不要將試管從MPcl土取下I將試管從MPCI上取下，加lmLX SL一A型緩沖液非常柔和地將試管中的所有物質再懸浮。不要形成漩渦。J將樣品試管中的所有液體定量轉移到有標簽的1 . smL微量離心管中K將微量離心管放到另一磁粒子濃縮器（MPCM）中，MPCM在放微量離心管的位置有一根磁條。L用手180°角輕輕地搖動試管每秒大約搖動一個180°角的頻率，持續大約1 min在這一步結束時，珠粒和卵囊會在試管的背面形成一個褐色圓點。M立即從留在MPCM上的試管和頂蓋中的上清液吸出。如果同時處理一個以上的樣品，就要在吸去每個試管的上清液之前，進行3個180°角的搖動或滾動的動作。小心不要擾亂與磁鐵鄰近管壁上的附著物不要搖動試管。當進行這些步驟時，不要將試管從MPCM上取下5.1.4.2.3磁珠與抱（卵）囊復合物的分離A將磁條從MPC一M上取下B加50ul 0.1 mol/l的鹽酸（HCI）至上述微量離心管中，用渦旋棍合10s。C將試管放在MPC一M上，然后讓它在室溫垂直靜止10min。D用力渦旋5s——10s.E保證所有樣品都在試管的底部，然后將微量離心管放在DynalMPcM上
F再將磁條放到MPCML，然后大約90°角頭尾相連地輕輕搖動試管。使試管的蓋頂和基底輪流上下傾斜，以每秒大約傾斜一次的頻率持續305G準備一個井型載玻片，然后加5ul 1mol/l的氫氧化鈉（NaOH）溶液至樣本井中。H不要將微量離心管從MPCM上取下將所有樣品從MPCM上的微量離心管中轉移到有氫氧化鈉的樣品井中。不要擾亂試管背壁上的珠粒。l重復步驟A一F，然后將樣品轉移到相同的井形載玻片上5.1.4.3染色5.1.4.3.1將有樣品的井形載玻片放到42℃的培養箱中，蒸發干5.1.4.3.2在每一含有干樣品的井中加一滴（50ul）純甲醇，然后讓它空干3 min——5 min。
5.1.4.3.3用試管準備所需體積（每井50ul）的抗隱抱子蟲抗體和抗賈第鞭毛蟲單克隆抗體異硫氰酸熒光素（FITC）工作稀釋液。5.1.4.3.4加50ul用上述異硫氰酸熒光素（FITC）單克隆抗體工作稀釋液至含樣本井中。將載玻片放到濕室中于37℃培養30 min左右5.1.4.3.5 30min后，取出載玻片，然后用一個干凈的頂端帶有真空源的巴斯德移液管輕輕地從每個井邊吸掉過量的熒光素標記單克隆抗體5.1.4.3.6在每個井中加70ul的PBS，靜止1min一2 min后．吸掉多余的PBS。5.1.4.3.7加50ulDAPI溶液（使用時配制，即加10ul2mg/ml溶于純甲醇中的DAPI于50ml的PHS中）到侮個井中，然后讓它在室溫靜止2面n左右。5.1.4.3.8吸掉過量的DAPI溶液。5.1.4.3.9加70uL的PBS到每個井中，靜止1 min一2 mln后，吸掉多余的PBSo5.1.4.3.1O加70ul的試劑水到每個井中，靜止lmin后，吸掉多余的試劑水5.1.4.3.11 讓載玻片在暗處干燥后，加一滴含防熒光減弱的封固劑到每個井的中心。
5.1.4.3.12在井形載玻片上蓋七蓋玻片，然后將它存放在干燥的暗盒中，備查   
   

 

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