2.2.3培養基與試劑2.2.3.1品紅亞硫酸鈉培養基2.2.3.1.1成分 A  蛋白膝                           10g B  酵母浸膏                         5g C  牛肉膏                           5g D  乳糖                             10g E  瓊脂                             15g——20g F  磷酸氫二鉀                       3.5g G  無水亞硫酸鈉                      5g H  堿性品紅乙醇溶液（50g/L)          20 mL I  蒸餾水                            1000 mL 2.2.3.1.2儲備培養基的制備    先將瓊脂加到500ml蒸餾水中，煮沸溶解，于另500ml一蒸餾水中加人磷酸氫二鉀、蛋白陳、酵母浸膏和牛肉膏，加熱溶解，倒人已溶解的瓊脂，補足蒸餾水至1000mL，混勻后調pH為7.2一7.4，再加人乳糖，分裝，68.95 kPa (115℃,10lb）高壓滅菌20min，儲存于冷暗處備用。   本培養基也可不加瓊脂，制成液體培養基，使用時加2 mL一3 mL于滅菌吸收墊上．再將濾膜置于培養墊上培養2.2.3.1.3平皿培養基的配制   將上法制備的儲備培養基加熱融化，用滅菌吸管按比例吸取一定量的50g/l的堿陛品紅乙醇溶液置于滅菌空試管中，再按比例稱取所需的無水亞硫酸鈉置于另一滅菌試管中，加滅菌水少許，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min以滅菌。   用滅菌吸管吸取已滅菌的亞硫酸鈉溶液，滴加于堿性品紅乙醇溶液至深紅色退成淡粉色為止，將此亞硫酸鈉與堿性品紅的混合液全部加到已融化的儲備培養基內，并充分混勻（防止產生氣泡），立即將此種培養基15 ml傾人已滅菌的空平皿內待冷卻凝固后置冰箱內備用。此種已制成的培養基于冰箱內保存不宜超過兩周。如培養基已由淡粉色變成深紅色，則不能再用2.2.3.2乳糖蛋白膝培養液同2.1.3.1。2.2.4儀器2.2.4.1濾器2.2.4.2濾膜，孔徑0.45um
2.2.4.3抽濾設備
2.2.4.4無齒鑷子。2.2.4.5其他儀器同多管發酵法2.1.42.2.5檢驗步驟2.2.5.1準備工作2.2.5.1.1濾膜滅菌：將濾膜放人燒杯中，加人蒸餾水，置于沸水浴中煮沸滅菌3次，每次巧m誼。前兩次煮沸后需更換水洗滌2次～3次，以除去殘留溶劑。2.2.5.1.2濾器滅菌：用點燃的酒精棉球火焰滅菌。也可用蒸汽滅菌器l03.43kPa (121℃，151b）高壓滅菌20min。
2.2.5.2過濾水樣   用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器，將100mL水樣（如水樣含菌數較多，可減少過濾水樣量，或將水樣稀釋）注人濾器中，打開濾器閥門，在一5.07*10（4）Pa（負0.5大氣壓）下抽濾。2.2.5.3培養   水樣濾完后，再抽氣約5s，關上濾器閥門，取下濾器，用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分。移放在品紅亞硫酸鈉培養基上，濾膜截留細菌面向上，濾膜應與培養基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡，然后將平皿倒置，放入37℃ 恒溫箱內培養24h士2h。2.2.6結果觀察與報告2.2.6.1挑取符合下列特征菌落進行革蘭氏染色、鏡檢：紫紅色、具有金屬光澤的菌落；深紅色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色、中心色較深的菌落2.2.6.1.1凡革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，再接種乳糖蛋白脈培養液，于37℃ 培養24h，有產酸產氣者，則判定為急大腸菌群陽性2.2.6.1.2按式（1）計算濾膜上生長的總大腸菌群數，以每100ml水樣中的總大腸菌群數（CFU／100ml)報告之
總大腸菌群菌落數（CFU／100ml)=數出的總大腸菌群數*100/過濾的水樣體積（ml）   
   

 

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