【原理】 鉤端螺旋體顯凝實驗是一種血清學反應,可用已知的抗原(標準菌株)來測定患者血清中的未知抗體及其效價來進行輔助診斷;也可用已知的抗體(標準免疫血清)來鑒定未知菌株的型別作血清學鑒定。鉤體運動活潑,在暗視野顯微鏡下,明顯可見,若遇到相應抗體時可發生凝集。如血清中的補體未滅活,時間過久出現凝集的鉤體發生溶解,則為鉤體的凝(集)溶(解)實驗。
【材料】
1、抗原的選擇和制備:將我國15群15型鉤端螺旋體代表株接種于:Korthof培養液中,28℃培養5—7天,暗視野顯微鏡檢查,暗視野顯微鏡400倍觀察每視野下不少于50條,運動活潑且無 自凝者可作顯凝抗原。
2、鉤體免疫血清(家兔免疫血清)做血清學診斷時用疑似患者的血清。
3、1ml無菌吸管、無菌試管、清潔載玻片及蓋玻片、0.9%氯化鈉溶液、塑料凹孔板、24—28℃溫箱。
【方法】
1、用0.95氯化鈉溶液將鉤端螺旋體免疫血清自1:50開始,做50倍系列稀釋,直到1:1600。
2、取各稀釋度免疫血清0.1ml分別加入塑料凹孔板中,最后1孔加0.1ml0.9%氯化鈉溶液作對照。
3、每孔加0.1ml鉤端螺旋體純培養物,搖勻,置28—30℃溫箱。
4、2小時后用接種環 自各孔中取1—2環于載玻片上,置暗視野顯微鏡下觀察。
【結果】 先觀察陰性對照孔,該孔如出現凝集則實驗失敗。該孔無凝集時方能觀察實驗孔,根據凝集程度以“+”記錄結果,結果判定參照如下標準進行。
-:完全無凝集,與對照管相同。
+:25% 以上鉤端螺旋體凝集呈小蜘蛛狀,大多數游離且運動活潑。
+ +:50%以上鉤端螺旋體凝集呈蜘蛛狀,約有半數未凝集。
+ + +:75%以上鉤端螺旋體凝集呈蜘蛛狀,其間有少數游離。
+ + + +:幾乎全部鉤端螺旋體凝集呈巨大蜘蛛狀,偶見極少數游離鉤端螺旋體存在。
效價判定:出現“+ +”的血清最高稀釋度(終末稀釋度———加入等量抗原后的稀釋度)為該血清的凝集效價。測定患者血清時,單份血清效價1:300以上有診斷意義,雙份血清呈4倍以上升高時,更有診斷價值。
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