1、準備自冰箱中取出試劑后,應置室溫平衡20—30分鐘使用。
2、配洗滌液以蒸餾水稀釋濃縮洗滌液即可。
3、稀釋標本在小試管內加稀釋液100ul、再加蒸餾水400ul混勻,作為應用稀釋液。加被檢血清5ul(1:100);尿和腦脊液不經稀釋而直接加50ul入孔內;胸腹水取25ul于0.5ml應用稀釋液中(1:20稀釋,血性胸、腹水作1;10稀釋即可)混勻。
4、加樣本分別吸取稀釋樣本50ul于酶標條孔內,并設臨界和陽性對照各1孔,分別加入臨界血清、陽性血清50ul,37℃水浴10分鐘,洗滌液洗滌3次,每次1分鐘,于吸水紙上拍干。
5、加酶結合物每孔加酶標記抗體應用液1滴,置37℃水浴1分鐘,洗滌液沖洗6次,每次1分鐘,于吸水紙上拍干。
6、加底物及終止反應每孔加底物I1滴、底物II1滴,37℃水浴1分鐘,每孔再加終止液1滴終止反應,混勻后判斷結果。
【結果】
1、抗體-lgM的檢測加終止液后,以空白對照孔校零,在波長450nm處讀取各孔的吸光值(A),凡A值>陰性對照孔均數的2倍的樣品孔,即為陽性。
2、抗體-lgM的檢測
目測法:呈現藍色深于臨界孔者為陽性,可按呈色深淺判定(+)——(+ + + +)表示陽性程度(陽性對照孔為+ +)。
比色法:每孔加終止液終止后用450nm波長進行比色計算,報告單位數。
測定單位=測定孔OD值 *100/臨界孔OD值 (>100單位者為陽性)
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