驗證用微生物接種菌液的制備,必須使用5代之內的菌種。取驗證(挑戰)微生物菌種(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、生孢梭菌;白色念珠菌等的新鮮培養物)至新鮮瓊脂培養基中(營養肉湯、硫乙醇酸鹽;改良馬丁培養基中),30—35℃培養18—524h;20—25℃培養18—24h(白色念珠菌),試管培養物加入0.9%無菌氯化鈉溶液約5ml或其他適宜的稀釋液,制成濃菌懸液,用上述培養物進行1ml—9ml的10倍系列稀釋,按《中國藥典》(2005年版)規定的平皿菌落計數法測定菌數,制成每毫升含菌10—100菌落形成單位(CFU)的菌懸液。備用。
將黑曲霉菌接種至真菌瓊脂斜面培養基上,20—25℃培養5—7d,使大量的孢子產生。加入3—5ml0.9%無菌氯化鈉溶液,用玻璃棒將孢子洗脫。然后,用管口帶有能過濾菌絲裝置(如薄的無菌棉花或紗布的無菌毛細吸管)吸出孢子菌液至無菌試管內,用濁度法或《中國藥典》(20058年版)規定的平皿菌落計數法測定菌數,將菌液稀釋至每毫升含10—1010個。備用。
以上確定供試用的菌液(稀釋菌液含10—100CFU/ml)就可作為驗證用接種液,接種液要保存在2—8℃的冰箱內,可于1周內使用,但要求在每次接種時須重新計數,以確證稀釋菌液的準確濃度。
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