3、建立使用標準操作規范（SOP）并嚴格管理:SOP內容至少要有以下幾點： 
（1）規定凈化系統使運轉時間要求每次實驗前應開啟凈化系統使運轉至少1h以上，同時開啟凈化臺和紫外燈。 
（2）物品進入潔凈室（無菌室）基本要求：凡進入潔凈室（無菌室）的物 品必須先在第一緩沖間內對外部表面用消毒劑消毒滅菌，再經物流緩沖間、傳遞窗1h以上，及無菌空氣吹干后送入無菌室。注意帶纖維、易發塵物品不得帶進凈化實驗室。無菌室內固定物品不得任意搬出。 
（3）人員進入潔凈室（無菌室）要求：實驗人員進入潔凈室（無菌室）不得化妝、帶手表、戒指等首飾；不得吃東西、嚼口香糖。應清潔手后進入第一緩沖間更衣，同時換上消毒隔離拖鞋，脫去外衣，用消毒液消毒雙手后戴上無菌手套，換上無菌連衣帽（不得讓頭發、衣等暴露在外面），戴上無菌口罩。然后，換或是再戴上第二副無菌手套，在進入第二緩沖間時換第二雙消毒隔離拖鞋。再經風淋室30s風淋后進入無菌室。 
（4）溫濕度觀察要求：觀察溫度計、濕度計上顯示的溫濕度是否在規定的范圍內，并作為實驗原始數據記錄在案。如發現問題應及時尋找原因，及時報修和及時報告實驗室主管，并將報修原因和結果記錄歸檔。 
（5）沉降菌落計數與浮游菌測定要求：在每次實驗同時，對操作室和層流臺做微生物沉降菌落計數，將結果記錄在使用登記本上，并作為實驗環境原始數據記錄在實驗報告上。每周1次，或在無菌檢查等必要時，在每次實驗同時對操作室和凈化臺進行浮游菌測定，將結果記錄在使用登記本上，并作為實驗環境原始數據記錄在實驗報告上。 
（6）消毒要求：無菌室每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液（常用消毒劑的品種有：5—20倍稀釋的碘伏水溶液、0.1%新潔爾滅溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（來蘇兒）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（處方：對羥基苯甲酸甲酯21.5g；對羥基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒劑品種與使用要進行有效性驗證方可使用，并定期更換消毒劑的品種）擦拭操作臺及可能污染的死角，方法是用無菌紗布浸漬消毒溶液清潔超凈臺的整個內表面、頂面、及無菌室、人流、物流、緩沖間的地板、傳遞窗、門把手。清潔消毒程序應從內向外，從高潔凈區到低潔凈區。逐步向外退出潔凈區域。然后開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌1—2h，以殺滅存留微生物。在每次操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺面，除去室內濕氣，用紫外燈殺菌30min。 
（7）其他要求：如遇停電，應立即停止實驗，離開無菌室。關閉所有電閘。重新進入無菌室前至少開啟機房運轉1h以上。 
4、潔凈度檢查的要求與方法：無菌室在消毒處理后，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數，以此來判斷無菌室是否達到規定的潔凈度，常有沉降菌和浮游菌測定方法。 
（1）沉降菌檢測方法及標準：以無菌方式將3個營養瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區臺面左、中、右各放1個；打開平板蓋，在空氣 中暴露30min后將平板蓋好，置32.5℃士2.5℃培養48h，取出檢查，3個平板上生長的菌落數平均小于1個。 
（2）浮游菌檢測方法及標準：用專門的采樣器，宜采用撞擊法機制的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，并配有流量計和定時器，嚴格按儀器說明書的要求操作并定時校檢，采樣器和培養皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養基為營養瓊脂培養基或藥典認可的其他培養基。使用時，先開動真空泵抽氣，時間不少于5min，調節流量、轉盤、轉速 。關閉真空泵，放入培養皿，蓋上采樣器蓋子后調節縫隙高度。置采樣口采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉動定時器，根據采樣量設定采樣時間。全部采樣結束后，將培養皿置32.5℃士2.5培養48h，取出檢查，浮游菌落數平均不得超過5個/m3。 
    每批培養基應選定3只培養皿做對照培養。 
    無菌操作臺面或超凈工作臺還應定期檢測其懸浮粒子，應達到100級（一般用塵埃粒子計數儀）檢測，并根據無菌狀況必要時置換過濾器。    
   

 

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