1、材料
“分子生物學診斷技術”。
2、方法
(1)DNA探針核酸雜交試驗:根據沙眼衣原體染色體和質粒的DNA序列設計的DNA探針,以核酸雜交法檢測沙眼衣原體,敏感性較高。采用非放射性核素標記技術后,已使用得相當普遍,但尚未估計出與非培養法相 比的優點。然而有一個突出優點,如與淋球菌的探針同時使用,則可同時檢測同一標本中的衣原體和淋球菌兩種病原體。
(2)特異性DNA的擴增技術:通常有兩種方法擴增衣原體的DNA,包括聚合酶鏈反應(PCR)和連接酶鏈反應(LCR)。
①PCR。用于衣原體PCR引物有16SrRNA基因、7.5kb質粒及MOMP基因。 16SrRNA基因高度保守,適宜構建衣原體屬特異性引物;7.5kb質粒及MOMP基因適于構建種或型特異性引物。
所有各種引物的PCR法,均比其他非培養法和細胞培養法敏感。擴增特異性的靶基因,有利于分子流行病學的研究,如MOMP基因可變區發生基因型變異。PCR也可用于治療效果的判定,由于質粒DNA的被清除至少1周,當能檢測出最小量DNA消失時,提示抗生素治療后,發生持續感染的可能性將相對減少。
②LCR。從1993年首先用于診斷衣原體感染以來,對男性和女性生殖道標本均有很高的敏感性,包括尿道、宮頸和晨尿標本。LCR已成為診斷衣原體的主要方法,在控制衣原體感染的計劃中是一種很有效的廣譜的篩選試驗。在所有各種標本中。敏感性是90%—95%,特異性為99.5%。
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