許多情況下,病毒顆粒與標本中其他顆粒混雜在一起,很難分辨形態。免疫電鏡技術是借助抗血清與病毒顆粒特異性結合,包被病毒使之凝聚加以區別。可以觀察病毒含量較少的標本是其優點。
1、原理
標本中的病毒與稀釋的血清中抗體結合形成抗原一抗體復合物,電鏡觀察。
2、材料
①20g/l磷鎢酸(PTA)。用雙蒸餾水配制20g/l磷鎢酸溶液,用1mol/lNaOH校正pH值為6.8。
②涂有炭及聚乙烯醇縮 甲醛的銅網。
③病毒相應抗血清。
④平皿、濾紙、游絲鑷子、微量毛細管,10g/l瓊脂凝膠塊,蠟皈。
3、操作方法
①取0.9ml病毒懸液,加入0.1ml稀釋的病毒相應血清,37℃30min,充分反應。
②取10g/l瓊脂凝膠塊,下面墊三層普通濾紙,將一滴抗原-抗體復合物懸滴在瓊脂凝膠塊上,將涂膜的銅網扣在懸滴表面使之漂浮。
③在懸滴未被吸干之前取下銅網,倒轉在蠟板上,立即滴加磷鎢酸染液染色1min,用濾紙毛邊吸干多余染液,電鏡觀察。
4、結果
顯示病毒形態、結構。
5、注意事項
注意掌握抗原、抗體比例,比例適當方可形成大小合適的抗原 ; 抗體復合物。
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