(1)黑斯莢膜染色法
①在莢膜菌涂片上(在空氣中 自然干燥,無需加熱固定)放一小塊濾紙片,之后滴加結晶紫染液。
②在火焰上微微加熱,使玻片上染液 冒蒸汽為止。
③用200g/l硫酸銅水溶液沖洗染液,切勿用流水沖洗。用吸水紙吸干后油鏡檢查。
結果:菌體呈紫色,莢膜呈淡紫色或無色。
(2)密爾莢膜染色法
①制片。常規法制片,干后加熱固定。
②染色。加石炭酸復紅液。微加熱染1min,水洗。
③媒染。加特殊媒染劑,作用0.5min,水洗。
④復染。加堿性美藍液,染1min,水洗。
⑤鏡檢。干后油鏡檢查。
結果:菌體呈鮮紅色,莢膜呈藍色。
(3)奧爾特莢膜染色法涂片、自然干燥、火焰 固定后滴加染液,經火焰加溫使染液產生蒸汽后,繼續染3min,水洗,待干,鏡檢。
結果:菌體呈赤褐色,莢膜呈黃色。
(4)濕墨水負染法
①加一滴墨水于潔凈的載玻片上,然后挑取少量菌體與其混合均勻。
②將一潔凈蓋玻片蓋在混合液上,然后在蓋玻片上放一張濾紙,輕輕按壓以吸去多余的混合液。加蓋玻片時勿產生氣泡,以免影響觀察。
③高倍鏡或油鏡檢查。
結果:背景灰色,菌體較暗,在菌體周圍呈現明亮的透明圈。
(5)干墨水負染法
①加一滴60g/l葡萄糖液于潔凈載玻片的一端,然后挑取少量菌體與其混合,再加一環墨水,充分混勻。
②另取一端邊緣光滑的載玻片作推片,將推片一端的邊緣置于混合液前方,然后稍向后拉,當推片與混合液接觸后,輕輕左右移動,使之沿推片接觸的后緣散開,爾后以大約30°角迅速將混合液推 向玻片另一端,使混合液鋪成薄層。
③空氣中自然干燥 。
④用甲醇浸沒涂片固定1min,棄去 甲醇。
⑤在酒精燈上方用文火干燥 。
⑥用甲基紫染1—2min。
⑦用自來水輕輕沖洗,自然干燥 。
⑧高倍鏡或油鏡檢查。
結果:背景灰色,菌體紫色,菌體周圍為清晰透明的莢膜。
(6)石炭酸復紅液染色法
①取培養了72h的莢膜菌制成涂片,自然干燥(不可用火焰烘干)。
②滴加1—2滴95%酒精固定(不可加熱固定)。
③加石炭酸復紅染液染色1—2min,水洗,自然干燥 。
④在載玻片一端加一滴墨水,用一塊邊緣光滑的載玻片與墨水接觸,再以勻速推向另端,涂成均勻的一薄層,自然干燥 。
⑤干燥后用油鏡觀察。
結果:菌體紅色,莢膜無色,背景黑色。
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