(1)實驗材料
①染色液。石炭酸復紅液、堿性美藍溶液、3%鹽酸酒精。
②菌種。含結核分枝桿菌的痰標本。
③其他。普通玻片、酒精燈、接種環及顯微鏡等。
(2)實驗方法
①涂片
a、直接涂片和厚膜涂片。用接種環挑取約0.01ml膿性或呈干酪樣部分痰液,制成10mm*10mm大小的均勻薄涂片,或取上述標本約0.1ml,制成20mm*15mm大小的厚膜涂片。自然干燥,火焰固定后,行抗酸染色或金胺“0”熒光染色,鏡檢。
b、集菌涂片。І、沉淀集菌法。取痰液2—3ml,40g/lNaOH1—2倍量混勻。經103.43Pa高壓滅菌20—25min(或煮30min),3000r/min離心30min,棄上清液,取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”熒光染色鏡檢;П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶內,加1—2倍量40g/lNaOH溶液,經103.43Pa高壓滅菌20—25min(或煮30min)。冷卻后滴加汽油0.3ml,瓶口蓋玻璃紙加塞,塞緊瓶口,置振蕩器或手搖振蕩10min,再加蒸餾水至滿瓶口而又不外溢,靜置10—15min,將已編號的潔凈載玻片蓋在瓶口上,靜置15—20min,取下載玻片并迅速將載玻片翻轉至浸膜向上,或用接種環取瓶口液面物涂于載玻片上,自然干燥,火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”熒光染色,鏡檢。
②染色
a、初染,在已固定的結核分枝桿菌痰標本涂片上放一小塊濾紙片,之后滴加數滴石炭酸復紅液后,將標本片放在火焰高處徐徐加溫,當涂片上液體出現蒸汽時離開火焰(切不可煮沸),待玻片稍冷卻后補充染液(以防干燥或玻片斷裂 ),如此維持染色3—5min,待玻片冷卻后用水沖洗,甩干。
b、脫色,在涂片上滴加數滴3%鹽酸酒精,輕輕晃動玻片,直至無紅色液體流下為止,一般作用1—3min,水洗,甩干。
c、復染,滴加數滴堿性美藍液于涂片上,作用1min后,水洗,甩干。用吸水紙印干標本片或 自然干燥后油鏡檢查。
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