一、生物滅菌指示劑

   生物滅菌指示劑是常用來檢測滅菌效果的方法之一，對于濕熱滅菌法，一般常用嗜熱脂肪地芽孢桿菌（也可使用其他??等效耐熱的菌株）的芽孢進行測試。目前市場上已有多種品牌??和形式的滅菌指示劑，常見的一般有紙片形式的和安瓿瓶（或其他玻璃管形狀）的產品。

  嗜熱脂肪地芽孢桿菌（原名嗜熱脂肪芽孢桿菌，后重新劃分歸屬于地芽孢桿菌屬，因此改名為嗜熱脂肪地芽孢桿菌）對熱有很強的耐受性，芽孢體耐熱性更強，因此常用其芽孢制作??生物?指示劑。嗜熱脂肪地芽孢桿菌最適生長溫度在55℃左右，大多數菌株生長溫度范圍在40℃-65℃，能發酵葡萄糖產酸，因此常用溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水（BCP）檢測其芽孢體是否存活。

二、生物指示劑的組成和制作

  若實驗室中有嗜熱脂肪地芽孢桿菌菌株，也可自行制作生物指示劑進行測試。首先將嗜熱脂肪地芽孢桿?菌接種至錳鹽營養瓊脂平板（因培養溫度較高，培養時間較長，平板需厚一些，也可使用錐形瓶做大斜面），55℃培養5-7天左右，可形成比較豐富的芽孢，將菌苔從平板上用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液洗下，100℃加熱30min可殺死繁殖體留下芽孢，稀釋后可采用涂布或傾??注法計數（通常使用DTA瓊脂，若沒有使用TSA也可以，置55℃培養24-48h），測定芽孢懸液濃度。

  將定量體積的芽孢懸液加入至紙片上干燥處理，使紙片中含有的芽孢數大約在1-5×10⁶CFU即可，搭配溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水管即可進行滅菌效果測定了。也可以將芽孢懸液加入至定量體積的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水中（通常可以用0.5-2mL，含芽孢量10⁶CFU）使用。制備好的指示劑可在2-8℃冰箱內冷藏。

三、滅菌生物指示劑的使用

  對于紙片的生物指示劑，放入滅菌鍋中按照固定程序滅菌后，將紙片放置于5mL的溴甲酚紫葡萄糖蛋?白胨水管（通常商品化培養基已配備）中55℃培養不少于7天，若出現變黃反應，說明芽孢未被殺死，滅菌效果不達標。

  對于較大體積培養基的滅菌效果測試，則應考慮使用密封的玻璃??管裝的滅菌指示劑放入培養基的內部進行監測，確認培養基的內部是否達到了相應的滅菌效果（特別是滅菌體積較大、容器密閉的情況下，更需要?注意檢測容器內部是否達到了相應的滅菌效果）。密封的玻璃管裝滅菌指示劑使用后直接置于55℃培養不超過7天即可，觀察是否有變黃現象出現。未使用的保存管應置于冷藏保存（若儲存環境溫度過高會導致芽孢萌發，培養基變黃）。

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