一、產品用途及原理:
用于細菌的復合生化試驗(動力靛基質尿素酶試驗)。
? 培養基為含尿素、蛋白胨的半固體培養基,指示劑為酚紅。具有色氨酸酶的細菌能分解色氨酸產生吲哚,加入吲哚試劑后,培養基上層的吲哚會變紅;有動力的細菌沿穿刺線擴散生長;有些細菌能產生尿素酶,將尿素分解、產生2個分子的氨,使培養基變為堿性,酚紅呈粉紅色。尿素酶不是誘導酶,因為不論底物尿素是否存在,細菌均能合成此酶,其活性最適pH為7.0。
二、培養基配方(g/L):
胰蛋白胨 |
10.0 |
磷酸氫二鉀 |
2.0 |
氯化鈉 |
5.0 |
酚紅 |
0.012 |
葡萄糖 |
1.0 |
瓊脂 |
4.0 |
pH 7.0±0.1 25℃ |
三、試驗方法:
?? 1. 稱取本品22g,加熱溶解于950ml蒸餾水中,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至45-50℃左右時,無菌加入40%的尿素溶液50mL,混勻,分裝試管備用。
2. 制備質控菌株。
3. 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺接種于試管中。
?? 4. 36±1℃培養18-24小時,擴散生長為動力陽性;滴加吲哚試劑后呈玫瑰紅色為陽性;培養基變紅尿素陽性,記錄實驗結果。
四、結果觀察與解釋
接種以下質控菌株,36±1℃培養18-24小時:
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
生長情況 |
其他特征 |
鼠傷寒沙門氏菌 |
ATCC14028 |
/ |
+++ |
動力+、吲哚-、尿素- |
普通變形桿菌 |
ATCC19114 |
/ |
+++ |
動力+、吲哚+、尿素+ |
大腸埃希氏菌 |
ATCC25922 |
/ |
+++ |
動力+、吲哚+、尿素- |
福氏志賀氏菌 |
ATCC12022 |
/ |
+++ |
動力-、吲哚-、尿素- |
? 圖1 動力-吲哚-尿素培養基(MIU)微生物質控結果
備注:a:鼠傷寒沙門氏菌,b:普通變形桿菌,c:大腸埃希氏菌,d:福氏志賀氏菌,e:空白
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